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汕头大学海洋科学接受调剂
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一路向北14

金虫 (小有名气)

[求助] M13蓝白斑筛选出现了蓝斑和白斑? 已有4人参与

我在用JM109大肠杆菌作宿主,将M13mp18 RF I DNA通过化学转化的方法转入JM109中,于含有IPTG和X-gal的LB培养基上过夜培养,长出来了片状的蓝斑和点点状的白斑,想问一下虫友们,有没有做过类似的实验,帮忙分析和指导一下,谢谢!

M13蓝白斑筛选出现了蓝斑和白斑?
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奔跑随风

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
一路向北14(dllchina代发): 金币+1, 鼓励应助 2014-07-08 22:01:08
你的应该是涂板没晾干,晾干之后就会是单个的单菌落,蓝色和白色的看的很清楚。
2楼2014-07-07 10:44:10
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499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+3, 鼓励新虫应助 2014-07-08 22:01:24
一路向北14: 金币+4 2014-07-12 09:23:02
看平板图片好像整个板都有菌存在,不知是否是图片问题,或者 可能存在污染或抗生素失效,涂板没涂均匀可能出现小块蓝斑,连接效率高,DNA多的话 是有可能基本不存在蓝斑,建议你可以把平板放冰箱4℃放个一天,假阳性的白斑往往会变为蓝斑,还有 个人人认为i可以重做一次 涂板 的菌液可适当减少,然后 最好涂匀,做个对照 看看效果
3楼2014-07-07 10:58:25
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
IPTG和X-gal没有涂匀,菌在少涂点,涂板水平要改善
ControlMyself
4楼2014-07-07 15:24:27
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一路向北14

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2014-07-07 10:58:25
看平板图片好像整个板都有菌存在,不知是否是图片问题,或者 可能存在污染或抗生素失效,涂板没涂均匀可能出现小块蓝斑,连接效率高,DNA多的话 是有可能基本不存在蓝斑,建议你可以把平板放冰箱4℃放个一天,假阳性 ...

我要的是蓝斑。之前转化了两次,没有长出白斑,不知道这次怎么长出白斑了,还有蓝斑怎么成片的生长,而不是单菌落呢?
5楼2014-07-07 17:08:58
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一路向北14

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2014-07-07 15:24:27
IPTG和X-gal没有涂匀,菌在少涂点,涂板水平要改善

可能涂板水平真的不好,但是菌涂少点的话,会不会长不出来?
6楼2014-07-07 17:11:07
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499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 一路向北14 at 2014-07-07 17:08:58
我要的是蓝斑。之前转化了两次,没有长出白斑,不知道这次怎么长出白斑了,还有蓝斑怎么成片的生长,而不是单菌落呢?...

成片的涨 最通常的解释 就是涂板没涂好,或者说有抗生素失效导致,蓝斑的话不是说明是空载体么?怎么要蓝斑?
7楼2014-07-08 08:58:54
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一路向北14

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 499649610 at 2014-07-08 08:58:54
成片的涨 最通常的解释 就是涂板没涂好,或者说有抗生素失效导致,蓝斑的话不是说明是空载体么?怎么要蓝斑?...

我是将M13mp18 RF DNA转入到JM109大肠中的,所以我需要的是蓝斑,但是白斑我不知道是什么东西?就是蓝斑也好奇怪?
8楼2014-07-08 09:48:07
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leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉是抗生素失效,不然不会出现这么高的转化效率。一般连接产物涂板,肯定会有单菌落。另外把板吹干一点再涂。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2014-07-08 10:26:03
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一路向北14

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-07-08 10:26:03
感觉是抗生素失效,不然不会出现这么高的转化效率。一般连接产物涂板,肯定会有单菌落。另外把板吹干一点再涂。

我没有加抗生素
10楼2014-07-08 10:53:34
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