24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2067  |  回复: 4

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

[求助] 阴性对照扩增出条带 已有1人参与

做菌液PCR鉴定质粒是否转化进农杆菌。第一次PCR,由于循环数少,菌液出现目的条带较弱,阴性对照未出现条带。第二次PCR,增加了循环数,菌液和阴性对照都出现了目的条带。第三次PCR,菌液反而未出现目的条带,阴性对照却出现了目的条带。这是什么情况,解释不通啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

在学术的汪洋里,扑腾。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
赵晓楠zxn: 金币+4, 有帮助 2014-06-27 17:25:54
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-06-27 18:49:02
赵晓楠zxn: 金币+6 2014-06-29 10:50:54
你这个对照拿的是水作为模板吗?如果是的话污染的可能性比较大
另外,第三次没P出来可能跟你的操作有关,是否有什么东西忘加了?
最好的方法就是提取质粒进行PCR
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-06-27 16:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-27 16:32:02
你这个对照拿的是水作为模板吗?如果是的话污染的可能性比较大
另外,第三次没P出来可能跟你的操作有关,是否有什么东西忘加了?
最好的方法就是提取质粒进行PCR

用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增,均能出现目的条带。
在学术的汪洋里,扑腾。
3楼2014-06-27 17:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 10:05:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵晓楠zxn at 2014-06-27 17:27:16
用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增,均能出现目的条带。...

首先,你要保证自己的操作没有问题。应该是多管分装而不是一管一管加的吧?
然后,你的引物是否特异性不太高?
最后,还是建议你抽一下质粒进行PCR验证比较好。
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-06-27 18:21:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

owl2010

金虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 10:05:26
因为农杆菌很脏,不建议直接进行菌检。
取100ul的菌液离心后倒掉菌液,用双蒸水进行悬浮,再用金属浴80度或者PCR仪裂解5到10分钟后进行菌检比较好。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
5楼2014-07-15 09:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 赵晓楠zxn 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本科211,293分请求调剂 +7 莲菜就是藕吧 2026-04-03 8/400 2026-04-05 11:41 by arrow8852
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 男生,一志愿沪9生物学071000,初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 环境285分,过六级,求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-04 5/250 2026-04-04 16:45 by cql1109
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +19 Doleres 2026-03-31 20/1000 2026-04-04 16:44 by 啊俊!
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿085404,总分291,四级已过,求调剂 +5 阿俊阿俊阿俊 2026-04-04 7/350 2026-04-04 13:23 by 莲菜就是藕吧
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +8 lmnlzy 2026-03-30 8/400 2026-04-03 13:08 by nalakaiqi
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 0856材料与化工调剂,339 +14 10213207 2026-03-31 14/700 2026-04-02 21:01 by 1104338198
[考研] 22408 266求调剂 +3 masss11222 2026-04-02 3/150 2026-04-02 18:11 by 笔落锦州
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 265求调剂 +11 yelck 2026-04-01 12/600 2026-04-01 19:12 by 549790059
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
[考研] 考研生物与医药调剂 +7 铁憨憨123425 2026-03-31 7/350 2026-04-01 08:45 by JourneyLucky
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +4 瓶子PZ 2026-03-31 4/200 2026-03-31 20:16 by vgtyfty
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
信息提示
请填处理意见