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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 阴性对照扩增出条带
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赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

[求助] 阴性对照扩增出条带 已有1人参与

做菌液PCR鉴定质粒是否转化进农杆菌。第一次PCR，由于循环数少，菌液出现目的条带较弱，阴性对照未出现条带。第二次PCR，增加了循环数，菌液和阴性对照都出现了目的条带。第三次PCR，菌液反而未出现目的条带，阴性对照却出现了目的条带。这是什么情况，解释不通啊。
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在学术的汪洋里，扑腾。
1楼 2014-06-27 15:39:28
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵晓楠zxn: 金币+4, ★有帮助 2014-06-27 17:25:54
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-27 18:49:02
赵晓楠zxn: 金币+6 2014-06-29 10:50:54
你这个对照拿的是水作为模板吗？如果是的话污染的可能性比较大
另外，第三次没P出来可能跟你的操作有关，是否有什么东西忘加了？
最好的方法就是提取质粒进行PCR
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-06-27 16:32:02
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赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-27 16:32:02
你这个对照拿的是水作为模板吗？如果是的话污染的可能性比较大
另外，第三次没P出来可能跟你的操作有关，是否有什么东西忘加了？
最好的方法就是提取质粒进行PCR

用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增，均能出现目的条带。
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在学术的汪洋里，扑腾。
3楼2014-06-27 17:27:16
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 10:05:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵晓楠zxn at 2014-06-27 17:27:16
用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增，均能出现目的条带。...

首先，你要保证自己的操作没有问题。应该是多管分装而不是一管一管加的吧？
然后，你的引物是否特异性不太高？
最后，还是建议你抽一下质粒进行PCR验证比较好。
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-27 18:21:01
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owl2010

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 10:05:26
因为农杆菌很脏，不建议直接进行菌检。
取100ul的菌液离心后倒掉菌液，用双蒸水进行悬浮，再用金属浴80度或者PCR仪裂解5到10分钟后进行菌检比较好。
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男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
5楼2014-07-15 09:10:57
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