24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2054  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

[求助] 阴性对照扩增出条带 已有1人参与

做菌液PCR鉴定质粒是否转化进农杆菌。第一次PCR,由于循环数少,菌液出现目的条带较弱,阴性对照未出现条带。第二次PCR,增加了循环数,菌液和阴性对照都出现了目的条带。第三次PCR,菌液反而未出现目的条带,阴性对照却出现了目的条带。这是什么情况,解释不通啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

在学术的汪洋里,扑腾。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 10:05:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵晓楠zxn at 2014-06-27 17:27:16
用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增,均能出现目的条带。...

首先,你要保证自己的操作没有问题。应该是多管分装而不是一管一管加的吧?
然后,你的引物是否特异性不太高?
最后,还是建议你抽一下质粒进行PCR验证比较好。
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-06-27 18:21:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
赵晓楠zxn: 金币+4, 有帮助 2014-06-27 17:25:54
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-06-27 18:49:02
赵晓楠zxn: 金币+6 2014-06-29 10:50:54
你这个对照拿的是水作为模板吗?如果是的话污染的可能性比较大
另外,第三次没P出来可能跟你的操作有关,是否有什么东西忘加了?
最好的方法就是提取质粒进行PCR
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-06-27 16:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-27 16:32:02
你这个对照拿的是水作为模板吗?如果是的话污染的可能性比较大
另外,第三次没P出来可能跟你的操作有关,是否有什么东西忘加了?
最好的方法就是提取质粒进行PCR

用YEB培养基做的阴性对照。可是第三次PCR同时用新旧培养基扩增,均能出现目的条带。
在学术的汪洋里,扑腾。
3楼2014-06-27 17:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

owl2010

金虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 10:05:26
因为农杆菌很脏,不建议直接进行菌检。
取100ul的菌液离心后倒掉菌液,用双蒸水进行悬浮,再用金属浴80度或者PCR仪裂解5到10分钟后进行菌检比较好。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
5楼2014-07-15 09:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上5B能上会吗? +4 redcom 2026-03-29 4/200 2026-03-29 17:39 by 最爱编纂辞典
[考研] 求调剂 +4 青春裁为三截 2026-03-29 4/200 2026-03-29 15:01 by 唐沐儿
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +10 nnnnnnn5 2026-03-25 10/500 2026-03-29 11:42 by longlotian
[考研] 材料学硕333求调剂 +11 北道巷 2026-03-24 11/550 2026-03-29 08:31 by fmesaito
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么! 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
信息提示
请填处理意见