24小时热门版块排行榜    

查看: 2020  |  回复: 7

shuiniu87987

银虫 (小有名气)

[交流] 原核表达His纯化仍有杂蛋白 已有5人参与

分别用10mM咪唑,20mM 和40mM咪唑洗脱,目的蛋白在80mM咪唑洗脱下来,但是目的蛋白下面是杂蛋白还是降解的蛋白?如何判断?多谢。

原核表达His纯化仍有杂蛋白
gal蛋白2截图.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

D_sheldon

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般刚洗脱出来的蛋白没有那么快就降解了的,个人觉得是杂蛋白呢。没有用比80mM高的浓度洗脱吗,我也纯化过HIS标签的蛋白是在80mM 100mM 150 200mM 都能洗脱下来带呢。所以建议你用更高浓度的洗脱 看是否能得到较单一的目的条带 而几乎没有杂蛋白。
如果要让我活让我骄傲的活
2楼2014-06-27 14:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiniu87987

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by D_sheldon at 2014-06-27 14:11:57
一般刚洗脱出来的蛋白没有那么快就降解了的,个人觉得是杂蛋白呢。没有用比80mM高的浓度洗脱吗,我也纯化过HIS标签的蛋白是在80mM 100mM 150 200mM 都能洗脱下来带呢。所以建议你用更高浓度的洗脱 看是否能得到较单 ...

80mM就把目的蛋白洗下来了。用过150mM,基本上什么都没有,应该是80mM的把蛋白都洗下来了吧
3楼2014-06-27 14:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiniu87987

银虫 (小有名气)

现在感觉降解的可能性大
4楼2014-06-28 16:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
降解没降解这个不好讲,但是假如这里面是杂蛋白的话,可以用下面方法来优化
用大量的40mM咪唑(比如8-10倍柱体积)尽可能多地洗下来杂蛋白,然后直接换成250mM之类的高浓度咪唑洗脱目的蛋白下来,就别用梯度洗脱了。之前的binding buffer里面也按说明书加上5-10mM的咪唑(好像有人最高加到20mM)也可以一定程度上减少这个问题.
5楼2014-07-01 09:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

salanero2000

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
即使容易降解,一般也有一个过程,请问从纯化收峰到电泳中间大概多久?
顺便问问有条件是否可以把破碎后、纯化前的样品电泳一下,做个对照?
6楼2014-08-07 10:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嗨_跟我走吧

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近用了别人送的海狸磁珠提取HIS标签目的蛋白试用试剂盒,还不错,有一两条杂蛋白,但是条带很弱,你可以试一试,而且时间2小时左右皆可以完成
7楼2014-08-26 10:57:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

91candy

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想问问在诱导的电泳道中,条带为什么是这样的?这是表达的蛋白多吗?还是这个大小的蛋白种类多?
8楼2015-05-04 15:38:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shuiniu87987 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
请填处理意见