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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 原核表达His纯化仍有杂蛋白
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shuiniu87987

银虫 (小有名气)

[交流] 原核表达His纯化仍有杂蛋白 已有5人参与

分别用10mM咪唑，20mM 和40mM咪唑洗脱，目的蛋白在80mM咪唑洗脱下来，但是目的蛋白下面是杂蛋白还是降解的蛋白？如何判断？多谢。

原核表达His纯化仍有杂蛋白
gal蛋白2截图.png
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1楼 2014-06-27 12:06:31
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salanero2000

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
即使容易降解，一般也有一个过程，请问从纯化收峰到电泳中间大概多久？
顺便问问有条件是否可以把破碎后、纯化前的样品电泳一下，做个对照？
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6楼2014-08-07 10:12:05
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D_sheldon

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般刚洗脱出来的蛋白没有那么快就降解了的，个人觉得是杂蛋白呢。没有用比80mM高的浓度洗脱吗，我也纯化过HIS标签的蛋白是在80mM 100mM 150 200mM 都能洗脱下来带呢。所以建议你用更高浓度的洗脱 看是否能得到较单一的目的条带 而几乎没有杂蛋白。
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如果要让我活让我骄傲的活
2楼2014-06-27 14:11:57
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shuiniu87987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by D_sheldon at 2014-06-27 14:11:57
一般刚洗脱出来的蛋白没有那么快就降解了的，个人觉得是杂蛋白呢。没有用比80mM高的浓度洗脱吗，我也纯化过HIS标签的蛋白是在80mM 100mM 150 200mM 都能洗脱下来带呢。所以建议你用更高浓度的洗脱 看是否能得到较单 ...

80mM就把目的蛋白洗下来了。用过150mM，基本上什么都没有，应该是80mM的把蛋白都洗下来了吧
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3楼2014-06-27 14:25:46
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shuiniu87987

银虫 (小有名气)
现在感觉降解的可能性大
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4楼2014-06-28 16:05:06
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