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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助！小分子重组蛋白不表达
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助！小分子重组蛋白不表达 已有2人参与

最近在做一个小分子蛋白的表达，目的基因230bp左右，与PET21a载体连接，测序正确后转入BL21，37℃ 1mM IPTG诱导4小时未见表达。基因无稀有密码子，蛋白无细胞毒性，想知道这种情况该怎么办？有没有比较适合表达小分子蛋白的菌或者有什么表达小分子蛋白的好方法？万分感谢！！
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1楼 2014-06-26 20:20:30
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-26 22:11:30
aayqaa: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-27 19:38:43
建议你用较低浓度的IPTG，我用过最低浓度是0.1mM，效果不错，当然这也需要你延长诱导的时间。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-26 21:35:14
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aayqaa: 金币+1 2014-06-27 19:39:47
是没有表达，还是表达后以包涵体的形式存在？
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2014-06-26 22:48:17
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-26 21:35:14
建议你用较低浓度的IPTG，我用过最低浓度是0.1mM，效果不错，当然这也需要你延长诱导的时间。

我试试，谢谢
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4楼2014-06-27 19:38:20
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-26 22:48:17
是没有表达，还是表达后以包涵体的形式存在？

全菌电泳未见表达，和空载一样
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5楼2014-06-27 19:39:28
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雪儿1993

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aayqaa at 2014-06-27 19:39:28
全菌电泳未见表达，和空载一样...

空载加iPTG了吗

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6楼2017-04-07 12:20:09
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雪儿1993

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-26 22:48:17
是没有表达，还是表达后以包涵体的形式存在？

怎么跑包涵体蛋白胶

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7楼2017-04-07 12:21:04
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