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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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成功源于想像

铜虫 (小有名气)

[求助] 片段回收后连接效率低下 已有1人参与

片段割胶回收后用于连接,效率总是比直接纯化后连接低,这是什么原因呢?怎么解决这个问题呢?
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成功源于想像

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 952038213 at 2014-06-27 13:52:09
1割胶回收量低,跑电泳时加大上样量。
2用快速连接酶,不要用过夜连接的,快速的多连一会,我是3000连到10000的上面,长出来克隆少,但有就足够了,大片段本来就不好连。
...

1)量不是问题;
2)这个建议不错,哪家的快速连接酶好呢?
8楼2014-06-30 20:57:37
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

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成功源于想像(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-26 22:31:25
胶回收的效率向来很低,你可以少用点PCR产物电泳检测,然后直接回收PCR产物中的DNA,用天根的试剂盒就行。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-26 21:41:17
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393658000

金虫 (小有名气)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-27 13:49:42
割胶回收的效率肯定比直接的PCR产物回收的效率姚笛,所以 你整体效率低的原因不是你说的那么回事 实际上是你割胶回收以后的量比你直接用PCR产物回收的量要低
3楼2014-06-27 08:43:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-27 13:49:47
多切一点产物回收,量就大点。这样就好连接。
4楼2014-06-27 11:23:36
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