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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 片段回收后连接效率低下
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成功源于想像

铜虫 (小有名气)

[求助] 片段回收后连接效率低下 已有1人参与

片段割胶回收后用于连接，效率总是比直接纯化后连接低，这是什么原因呢？怎么解决这个问题呢？
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1楼 2014-06-26 19:52:42
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952038213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
成功源于想像(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 20:52:08
1割胶回收量低，跑电泳时加大上样量。
2用快速连接酶，不要用过夜连接的，快速的多连一会，我是3000连到10000的上面，长出来克隆少，但有就足够了，大片段本来就不好连。

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-06-27 13:52:09
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
★ ★ ★
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成功源于想像(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-26 22:31:25
胶回收的效率向来很低，你可以少用点PCR产物电泳检测，然后直接回收PCR产物中的DNA，用天根的试剂盒就行。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-26 21:41:17
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393658000

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-27 13:49:42
割胶回收的效率肯定比直接的PCR产物回收的效率姚笛，所以 你整体效率低的原因不是你说的那么回事 实际上是你割胶回收以后的量比你直接用PCR产物回收的量要低
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3楼2014-06-27 08:43:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-27 13:49:47
多切一点产物回收，量就大点。这样就好连接。
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4楼2014-06-27 11:23:36
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