应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题
51/1返回列表
查看: 2004  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题 已有2人参与

各位大侠，本人最近遇到一些怪事，我构建好表达载体后，转入农杆菌C58C1，在相应抗生素板上挑取单克隆，菌液PCR后，可以检测到表达载体的抗生素基因，也可以检测到载体的某一固定片段，但是唯独检测不到构建到表达载体上的目的基因。之前，先从大肠杆菌中提取的质粒即这个表达载体，多对引物检测都没问题，目的基因也在。不知是不是在转化农杆菌的过程中载体上的目的基因丢失了？有没有这个可能呢？
求解啊，先谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
认真是一种习惯
1楼 2014-06-24 17:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zmj521good(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:06
zmj521good: 金币+1 2014-06-25 09:43:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-24 20:33:19
载体在转化农杆菌前，是从阳性克隆提取的，且经过PCR验证了，是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。...

个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低，所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列，就能确定是哪种情况了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-06-24 23:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zmj521good: 金币+1 2014-06-24 20:33:32
可能只是转了个空载体进去
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-24 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 20:27:04
可能只是转了个空载体进去

载体在转化农杆菌前，是从阳性克隆提取的，且经过PCR验证了，是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。
赞一下 回复此楼
认真是一种习惯
3楼2014-06-24 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 23:39:50
个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低，所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列，就能确定是哪种情况了。...

之前在entry clone中已经测过序了，所以LR反应后的expression clone就没有测，应该序列是正确的，我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中，再挑单克隆，应该这回不会存在可能的空载体污染了。
赞一下 回复此楼
认真是一种习惯
5楼2014-06-26 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭