24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2243  |  回复: 7

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题 已有2人参与

各位大侠,本人最近遇到一些怪事,我构建好表达载体后,转入农杆菌C58C1,在相应抗生素板上挑取单克隆,菌液PCR后,可以检测到表达载体的抗生素基因,也可以检测到载体的某一固定片段,但是唯独检测不到构建到表达载体上的目的基因。之前,先从大肠杆菌中提取的质粒即这个表达载体,多对引物检测都没问题,目的基因也在。不知是不是在转化农杆菌的过程中载体上的目的基因丢失了?有没有这个可能呢?
求解啊,先谢谢啦!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

认真是一种习惯
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good: 金币+1 2014-06-24 20:33:32
可能只是转了个空载体进去
2楼2014-06-24 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 20:27:04
可能只是转了个空载体进去

载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。
认真是一种习惯
3楼2014-06-24 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:06
zmj521good: 金币+1 2014-06-25 09:43:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-24 20:33:19
载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。...

个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。
4楼2014-06-24 23:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 23:39:50
个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。...

之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。
认真是一种习惯
5楼2014-06-26 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-26 11:44:37
之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。...

LR反应后的表达载体应该也要测序验证。
6楼2014-06-26 15:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-06-26 23:05:47
这基本上可以肯定你转化的不是目标质粒,重新做下试试,如果问题还存在再说

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-06-26 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1 2014-06-30 22:38:56
是细胞的返祖现象吗?对转进的质粒丢失的现象?

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-06-27 14:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zmj521good 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料299专硕求调剂 +13 +21 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:16 by 张zhihao
[考研] 335求调剂 +18 想上岸呀!! 2026-04-12 19/950 2026-04-13 14:15 by 张zhihao
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[教师之家] 请问地理、遥感方面,可以做哪些横向项目啊,纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 080100力学316求调剂 +8 L_Hairui 2026-04-07 8/400 2026-04-11 10:00 by zhq0425
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 吉大计算机技术331分,英语六级,求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 085400电子信息类(川大控制工程)求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 专硕085403,291分,有两篇专利,一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见