应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题
81/1返回列表
查看: 2515  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题 已有2人参与

各位大侠，本人最近遇到一些怪事，我构建好表达载体后，转入农杆菌C58C1，在相应抗生素板上挑取单克隆，菌液PCR后，可以检测到表达载体的抗生素基因，也可以检测到载体的某一固定片段，但是唯独检测不到构建到表达载体上的目的基因。之前，先从大肠杆菌中提取的质粒即这个表达载体，多对引物检测都没问题，目的基因也在。不知是不是在转化农杆菌的过程中载体上的目的基因丢失了？有没有这个可能呢？
求解啊，先谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
认真是一种习惯
1楼 2014-06-24 17:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zmj521good: 金币+1 2014-06-24 20:33:32
可能只是转了个空载体进去
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-24 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 20:27:04
可能只是转了个空载体进去

载体在转化农杆菌前，是从阳性克隆提取的，且经过PCR验证了，是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。
赞一下 回复此楼
认真是一种习惯
3楼2014-06-24 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zmj521good(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:06
zmj521good: 金币+1 2014-06-25 09:43:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-24 20:33:19
载体在转化农杆菌前，是从阳性克隆提取的，且经过PCR验证了，是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。...

个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低，所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列，就能确定是哪种情况了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-06-24 23:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 23:39:50
个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低，所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列，就能确定是哪种情况了。...

之前在entry clone中已经测过序了，所以LR反应后的expression clone就没有测，应该序列是正确的，我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中，再挑单克隆，应该这回不会存在可能的空载体污染了。
赞一下 回复此楼
认真是一种习惯
5楼2014-06-26 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-26 11:44:37
之前在entry clone中已经测过序了，所以LR反应后的expression clone就没有测，应该序列是正确的，我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中，再挑单克隆，应该这回不会存在可能的空载体污染了。...

LR反应后的表达载体应该也要测序验证。
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-26 15:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zmj521good: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-06-26 23:05:47
这基本上可以肯定你转化的不是目标质粒，重新做下试试，如果问题还存在再说

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-26 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zmj521good: 金币+1 2014-06-30 22:38:56
是细胞的返祖现象吗？对转进的质粒丢失的现象？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-27 14:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zmj521good 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:23 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:17 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭