Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2253  |  回复: 7

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题 已有2人参与

各位大侠,本人最近遇到一些怪事,我构建好表达载体后,转入农杆菌C58C1,在相应抗生素板上挑取单克隆,菌液PCR后,可以检测到表达载体的抗生素基因,也可以检测到载体的某一固定片段,但是唯独检测不到构建到表达载体上的目的基因。之前,先从大肠杆菌中提取的质粒即这个表达载体,多对引物检测都没问题,目的基因也在。不知是不是在转化农杆菌的过程中载体上的目的基因丢失了?有没有这个可能呢?
求解啊,先谢谢啦!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

认真是一种习惯
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good: 金币+1 2014-06-24 20:33:32
可能只是转了个空载体进去
2楼2014-06-24 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 20:27:04
可能只是转了个空载体进去

载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。
认真是一种习惯
3楼2014-06-24 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:06
zmj521good: 金币+1 2014-06-25 09:43:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-24 20:33:19
载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。...

个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。
4楼2014-06-24 23:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 23:39:50
个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。...

之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。
认真是一种习惯
5楼2014-06-26 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-26 11:44:37
之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。...

LR反应后的表达载体应该也要测序验证。
6楼2014-06-26 15:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-06-26 23:05:47
这基本上可以肯定你转化的不是目标质粒,重新做下试试,如果问题还存在再说

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-06-26 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1 2014-06-30 22:38:56
是细胞的返祖现象吗?对转进的质粒丢失的现象?

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-06-27 14:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zmj521good 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 药学305求调剂 +6 玛卡巴卡boom 2026-04-11 6/300 2026-04-14 19:48 by zhouxiaoyu
[考研] 求助调剂,跨调 +18 X十甫寸Y 2026-04-11 19/950 2026-04-14 19:26 by Art1977
[考研] 296求调剂 +8 汪!?! 2026-04-09 9/450 2026-04-14 15:15 by 逆水乘风
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +14 电气李 2026-04-13 15/750 2026-04-14 14:58 by 逆水乘风
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 求调剂 +12 璃茉一定上岸 2026-04-10 13/650 2026-04-14 00:08 by Equinoxhua
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +11 池池池池池池 2026-04-08 11/550 2026-04-13 14:10 by 科研论
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂,接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
信息提示
请填处理意见