24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2255  |  回复: 7

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 表达载体转农杆菌后的基因丢失问题 已有2人参与

各位大侠,本人最近遇到一些怪事,我构建好表达载体后,转入农杆菌C58C1,在相应抗生素板上挑取单克隆,菌液PCR后,可以检测到表达载体的抗生素基因,也可以检测到载体的某一固定片段,但是唯独检测不到构建到表达载体上的目的基因。之前,先从大肠杆菌中提取的质粒即这个表达载体,多对引物检测都没问题,目的基因也在。不知是不是在转化农杆菌的过程中载体上的目的基因丢失了?有没有这个可能呢?
求解啊,先谢谢啦!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

认真是一种习惯
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good: 金币+1 2014-06-24 20:33:32
可能只是转了个空载体进去
2楼2014-06-24 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 20:27:04
可能只是转了个空载体进去

载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。
认真是一种习惯
3楼2014-06-24 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zmj521good(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:06
zmj521good: 金币+1 2014-06-25 09:43:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-24 20:33:19
载体在转化农杆菌前,是从阳性克隆提取的,且经过PCR验证了,是有目的基因片段的。所以应该没有被空载体污染。...

个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。
4楼2014-06-24 23:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2014-06-24 23:39:50
个人认为目的片段从表达载体上丢失的概率非常低,所以推测更有可能是空载体污染。可以在你插入位点一端设计引物测下载体序列,就能确定是哪种情况了。...

之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。
认真是一种习惯
5楼2014-06-26 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zmj521good at 2014-06-26 11:44:37
之前在entry clone中已经测过序了,所以LR反应后的expression clone就没有测,应该序列是正确的,我现在又把那个质粒再重新转导DH5α中,再挑单克隆,应该这回不会存在可能的空载体污染了。...

LR反应后的表达载体应该也要测序验证。
6楼2014-06-26 15:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-06-26 23:05:47
这基本上可以肯定你转化的不是目标质粒,重新做下试试,如果问题还存在再说

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-06-26 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zmj521good: 金币+1 2014-06-30 22:38:56
是细胞的返祖现象吗?对转进的质粒丢失的现象?

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-06-27 14:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zmj521good 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学求调剂 +10 RussHu 2026-04-12 12/600 2026-04-15 12:02 by zhping515
[考研] 296求调剂 +10 汪!?! 2026-04-09 11/550 2026-04-15 09:17 by fenglj492
[考研] 化学070300 求调剂 +23 哈哈哈^_^ 2026-04-12 23/1150 2026-04-14 16:30 by zhouxiaoyu
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 28/1400 2026-04-14 15:44 by zs92450
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 346,工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 吉大计算机技术331分,英语六级,求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿京区985,085401电子信息,本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 复试调剂,一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 086004 求调剂 309 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-09 13:59 by Delta2012
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
信息提示
请填处理意见