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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 农杆菌感受态细胞 是否有质粒
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 农杆菌感受态细胞 是否有质粒

各种虫友好！

我现在用的农杆菌感受态细胞是自己制作的，利用发根农杆菌A4和CaCl2，保存在-80，因为A4有卡那抗性，而我现在做的重组质粒也是卡那抗性的，所以现在即使转化进去也无法进行筛选。。。。

请问各位，自己做的农杆菌感受态细胞还有质粒么？是不是就没抗性的了呢？

如果有，我应该怎么办呢？是要更换一个菌种，还是？我看现在的发根农杆菌除了ATCC系列的，好像都是经人工改造的Kan抗性，可是ATCC菌种购买不到，而且到货要3个月。。。

快毕业的孩纸伤不起啊。。。。。。。

求助各位。。。。。。。。
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1楼 2013-05-30 16:05:10
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主做之前应该好好考虑啊，重组质粒需要有不同抗性。你做感受态，不影响原本菌株的抗性。试试向其他实验室求助吧，找个其他抗性的菌株或者重做质粒
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2楼2013-05-30 16:22:48
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顾在

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-30 16:22:48
楼主做之前应该好好考虑啊，重组质粒需要有不同抗性。你做感受态，不影响原本菌株的抗性。试试向其他实验室求助吧，找个其他抗性的菌株或者重做质粒

自己做的农杆菌感受态细胞有质粒。
相同抗性也没关系吧，你可以做完转化后用载体上一个引物与基因上的引物检测下，若对了，你就抽提质粒（虽然质粒抽提效果不如大肠杆菌的），转到大肠杆菌中后抽提质粒酶切验证下，虽然麻烦，但可行。
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3楼2013-06-10 22:51:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 顾在 at 2013-06-10 22:51:24
自己做的农杆菌感受态细胞有质粒。
相同抗性也没关系吧，你可以做完转化后用载体上一个引物与基因上的引物检测下，若对了，你就抽提质粒（虽然质粒抽提效果不如大肠杆菌的），转到大肠杆菌中后抽提质粒酶切验证下 ...

你说得对，可以这么做，只是太麻烦了，最好在一开始设计时考虑好。
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4楼2013-06-10 22:55:02
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