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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 农杆菌感受态细胞 是否有质粒

各种虫友好!

我现在用的农杆菌感受态细胞是自己制作的,利用发根农杆菌A4和CaCl2,保存在-80,因为A4有卡那抗性,而我现在做的重组质粒也是卡那抗性的,所以现在即使转化进去也无法进行筛选。。。。

请问各位,自己做的农杆菌感受态细胞还有质粒么?是不是就没抗性的了呢?

如果有,我应该怎么办呢?是要更换一个菌种,还是?我看现在的发根农杆菌除了ATCC系列的,好像都是经人工改造的Kan抗性,可是ATCC菌种购买不到,而且到货要3个月。。。

快毕业的孩纸伤不起啊。。。。。。。

求助各位。。。。。。。。
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 顾在 at 2013-06-10 22:51:24
自己做的农杆菌感受态细胞有质粒。
相同抗性也没关系吧,你可以做完转化后用载体上一个引物与基因上的引物检测下,若对了,你就抽提质粒(虽然质粒抽提效果不如大肠杆菌的),转到大肠杆菌中后抽提质粒酶切验证下 ...

你说得对,可以这么做,只是太麻烦了,最好在一开始设计时考虑好。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2013-06-10 22:55:02
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主做之前应该好好考虑啊,重组质粒需要有不同抗性。你做感受态,不影响原本菌株的抗性。试试向其他实验室求助吧,找个其他抗性的菌株或者重做质粒
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-05-30 16:22:48
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顾在

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-30 16:22:48
楼主做之前应该好好考虑啊,重组质粒需要有不同抗性。你做感受态,不影响原本菌株的抗性。试试向其他实验室求助吧,找个其他抗性的菌株或者重做质粒

自己做的农杆菌感受态细胞有质粒。
相同抗性也没关系吧,你可以做完转化后用载体上一个引物与基因上的引物检测下,若对了,你就抽提质粒(虽然质粒抽提效果不如大肠杆菌的),转到大肠杆菌中后抽提质粒酶切验证下,虽然麻烦,但可行。
3楼2013-06-10 22:51:24
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