24小时热门版块排行榜

返回列表

蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 445.5
帖子: 38
在线: 10.9小时
虫号: 2654656
注册: 2013-09-14
性别: MM
专业: 食品科学基础

[求助] 质粒PCR扩增目的基因条带太浅是不是不能继续做回收了已有1人参与

我将目的基因连接T载体后转化大肠杆菌，挑白色菌落扩大培养后提质粒，没有做质粒电泳，直接用质粒为模板扩增目的基因，质粒0.4微升，15微升PCR体系，扩增后目的条带很浅，还有杂带（包含目的基因的条带），这样子再做双酶切回收基因的话是不是浓度太低不能回收啊，如果我将提取质粒的菌液加多能不能解决问题呢

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带已经有18人回复
重组质粒目的基因PCR 已经有8人回复
菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？已经有13人回复
大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带已经有5人回复
为什么菌液PCR的条带比目的基因小很多。已经有9人回复
我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。已经有18人回复
欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！已经有25人回复
16srRNA基因PCR扩增条带总出现在最下方什么原因？已经有13人回复
未插入目的片段的空载体质粒怎么扩增出目的条带，求解，求真相！！！！已经有4人回复
目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带已经有10人回复
PCR扩增不出目的条带已经有12人回复
提取质粒之后又三条带, 需要切胶回收未开环DNA再进行酶切吗? 已经有10人回复
质粒ＰＣＲ扩不出目的条带，且有杂带，但是直接测序有结果？为什么？？？？？已经有7人回复
RACE 3'基因pcr 泡出来的条带是100多bp!!!!到底是不是我的目的基因呀已经有19人回复
RT-PCR扩增目的基因片度大小是362bp，PCR的时候使用什么聚合酶好些呢？已经有5人回复
PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带已经有16人回复
RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来已经有14人回复
以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带已经有6人回复
PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？已经有4人回复
基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱求助已经有3人回复
【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带已经有7人回复
【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因已经有13人回复

1楼2014-06-24 14:18:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小豆子J

铜虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 114.3
红花: 1
帖子: 20
在线: 7.8小时
虫号: 3260558
注册: 2014-06-07
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:34:46
蓝色泡沫321: 金币+12 2014-07-10 14:48:56
蓝色泡沫321: 金币+1, ★有帮助 2014-07-10 15:05:12

恩，一般条带太浅，做胶回收也不会回收到东西。平时我是50ul的体系，质粒是加1ul

赞一下

回复此楼

2楼2014-07-09 08:36:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小豆子J

铜虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 114.3
红花: 1
帖子: 20
在线: 7.8小时
虫号: 3260558
注册: 2014-06-07
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蓝色泡沫321: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-10 14:49:08
蓝色泡沫321: 金币+1, ★有帮助 2014-07-10 15:05:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 15:14:41

1.提取质粒可以尝试直接双酶切回收目的基因
2.PCR体系中模版有点多（质粒拷贝数较高，模版浓度偏高）
3.对于杂带的问题，可以提高退火温度
4.关于条带浅回收不到足够的片段，可以加大PCR体系

赞一下

回复此楼

3楼2014-07-10 08:26:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主蓝色泡沫321 的主题更新

返回列表