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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 质粒PCR扩增目的基因条带太浅是不是不能继续做回收了 已有1人参与

我将目的基因连接T载体后转化大肠杆菌,挑白色菌落扩大培养后提质粒,没有做质粒电泳,直接用质粒为模板扩增目的基因,质粒0.4微升,15微升PCR体系,扩增后目的条带很浅,还有杂带(包含目的基因的条带),这样子再做双酶切回收基因的话是不是浓度太低不能回收啊,如果我将提取质粒的菌液加多能不能解决问题呢
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:34:46
蓝色泡沫321: 金币+12 2014-07-10 14:48:56
蓝色泡沫321: 金币+1, 有帮助 2014-07-10 15:05:12
恩,一般条带太浅,做胶回收也不会回收到东西。平时我是50ul的体系,质粒是加1ul
2楼2014-07-09 08:36:59
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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蓝色泡沫321: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-07-10 14:49:08
蓝色泡沫321: 金币+1, 有帮助 2014-07-10 15:05:19
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 15:14:41
1.提取质粒可以尝试直接双酶切回收目的基因
2.PCR体系中模版有点多(质粒拷贝数较高,模版浓度偏高)
3.对于杂带的问题,可以提高退火温度
4.关于条带浅回收不到足够的片段,可以加大PCR体系
3楼2014-07-10 08:26:40
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