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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] 关于带GST标签蛋白亲和层析纯化的问题 已有1人参与

最近做带GST标签蛋白的纯化,遇到两个问题。
1、最近的一次过柱子,没有加pp酶,直接洗脱,感觉蛋白的标签自己掉下来了,SDS电泳看到与往常相比多了掉了标签的目的蛋白和26多KD的标签蛋白(至少位置是对的)。请问这种情况有可能出现吗?
2、另外大家过柱子,结合填料后,洗涤柱子和洗脱蛋白时,会摇动填料吗(让填料重新悬浮起来)?还是轻轻的加进去,自然流下来?

求大神解答....
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danchai

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是抗原降解了,可以加EDTA进行超声纯化
2楼2014-06-25 17:03:19
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