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关于带GST标签蛋白亲和层析纯化的问题
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windleakey
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在线: 92.5小时
虫号: 1894719
注册: 2012-07-16
性别: GG
专业: 环境微生物学
[
求助
]
关于带GST标签蛋白亲和层析纯化的问题
已有1人参与
最近做带GST标签蛋白的纯化,遇到两个问题。
1、最近的一次过柱子,没有加pp酶,直接洗脱,感觉蛋白的标签自己掉下来了,SDS电泳看到与往常相比多了掉了标签的目的蛋白和26多KD的标签蛋白(至少位置是对的)。请问这种情况有可能出现吗?
2、另外大家过柱子,结合填料后,洗涤柱子和洗脱蛋白时,会摇动填料吗(让填料重新悬浮起来)?还是轻轻的加进去,自然流下来?
求大神解答....
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1楼
2014-06-10 22:51:10
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danchai
银虫
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在线: 9.6小时
虫号: 1016687
注册: 2010-05-12
性别:
MM
专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
应该是抗原降解了,可以加EDTA进行超声纯化
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2楼
2014-06-25 17:03:19
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