应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收 连接
51/1返回列表
查看: 1980  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

周兵lofter

新虫 (小有名气)

[求助] 胶回收 连接 已有4人参与

胶回收的产物是不纯的 有4000和2000. 但我想进行连接转化，之后挑菌，做菌液pcr，但跑胶后出现的都是2000的。4000的没连进去。请问的是能不能延长连接反应时间解决这个问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
乐观向上 积极拼搏 热爱生命 用心生活
1楼 2014-06-06 10:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
7楼: Originally posted by 周兵lofter at 2014-06-09 20:19:32
亲  咱把胶回收后的产物  做模版， 用原来的引物，在做一次pcr。这样会出现什么样的条带呢？...

是你的引物还算特异，即便不特异，扩出来的2k不在4k里，那样比较理想，应该全是4k的，相当于巢式

你扩增的时候，2k和4k的亮度对比如何，如果二者扩增效率差不多，那么这样倒不失为一个好方法，如果2k的扩增效率高的话，额，不好说
赞一下 回复此楼
天行健
8楼2014-06-10 09:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-06 12:36:29
既然2k和4k
你为什么不跑的长点，然后单独切出来4k啊？
延长连接时间，是可以让链接效率提高
但是问题是，4k的提高比起2k的提高，可以忽略不计
另外，在生长过程中，4k的会很快被2k的给掩盖过去
最后你只能挑出2k的片段，4k的可能只有不到百分之一，那工作量啊，太大了

强烈建议你重新切胶，我们相隔200bp的都可以切开
赞一下 回复此楼
天行健
2楼2014-06-06 10:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周兵lofter

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-05 20:53:08
既然2k和4k
你为什么不跑的长点，然后单独切出来4k啊？
延长连接时间，是可以让链接效率提高
但是问题是，4k的提高比起2k的提高，可以忽略不计
另外，在生长过程中，4k的会很快被2k的给掩盖过去
最后你只能挑出 ...

亲  我也是这么想的 胶回收胶回收。也分的很开  然后切。。。但还是有2000的条带。。然后我接着在做胶回收，最后一次只能隐约的看到上面那条了。。。但连接转化后，没有长出菌落。。。  但是最后这次我是不能确定有没有2000了，因为4000的条带也很微弱了。。。
赞一下 回复此楼
乐观向上 积极拼搏 热爱生命 用心生活
3楼2014-06-06 11:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grase

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
周兵lofter(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-06 12:36:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by 周兵lofter at 2014-06-06 11:07:38
亲  我也是这么想的 胶回收胶回收。也分的很开  然后切。。。但还是有2000的条带。。然后我接着在做胶回收，最后一次只能隐约的看到上面那条了。。。但连接转化后，没有长出菌落。。。  但是最后这次我是不能确定有 ...

4000的再扩增点吧。可以过夜连，连时间长点。
如果量少，阳性克隆也少。
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-06 11:14:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +9 Lanmanbaby 2026-08-09 17/850 2026-08-10 10:35 by Tide man
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +7 yufeiwaner 2026-08-09 7/350 2026-08-10 09:08 by zju2000
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭