24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3227  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

[求助] 关于半定量PCR的内参调节问题 已有5人参与

最近在做半定量PCR,确定了内参基因的循环数,但是内参基因额亮度一直不好调整,需要调整模板CDNA的浓度,但是工作量太大了,我想问一下有没有哪位大侠知道如何快速调整CDNA的模板量,从而使得内参基因在选定的扩增循环数内亮度相同呢?不胜感激。@西瓜@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

生命不息奋斗不止
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-05-18 20:07:07
1. 提取的RNA要测定浓度,然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA(之所以稀释RNA,是为了在反转录时减小加样误差)
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率,如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话,需 ...

非常感谢  最开始的RNA没有很好的调到一致的浓度,现在想要直接测定CDNA的浓度来调整模板量  不知道可行度高不高
生命不息奋斗不止
5楼2014-05-18 23:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冷雁孤旅(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:52:29
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:27:27
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录,然后取相同体积的cDNA做内参,一般会齐
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-18 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:30:19
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:17:26
1. 提取的RNA要测定浓度,然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA(之所以稀释RNA,是为了在反转录时减小加样误差)
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率,如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话,需要先校正PCR仪。
3楼2014-05-18 20:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-18 18:09:41
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录,然后取相同体积的cDNA做内参,一般会齐

最开始提取的RNA,我测了RNA的浓度,浓度参差不齐,不好调整,我就直接都取了7ulRNA反转,现在半定量的内参亮度也不同,现在可i以测定反转录的CDNA的浓度 来补救么?我想要是CDNA的浓度相同的话,那么内参的扩增亮度是否也相同呢
生命不息奋斗不止
4楼2014-05-18 23:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 电子信息270求调剂 +7 terminal469 2026-04-07 7/350 2026-04-08 08:48 by tt19890111
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂 +13 lftmya 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:45 by JourneyLucky
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 一志愿北京2,材料与化工308求调剂 +16 熊二想上岸 2026-04-04 17/850 2026-04-07 14:58 by BruceLiu320
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-05 10/500 2026-04-06 09:30 by dongzh2009
[考研] 302求调剂一志愿华中师范大学 +8 小江小江江江 2026-04-02 8/400 2026-04-04 19:50 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 261求B区调剂 +5 明仔· 2026-04-01 7/350 2026-04-02 11:17 by 邹尉尉
信息提示
请填处理意见