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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

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[求助] 关于半定量PCR的内参调节问题已有5人参与

最近在做半定量PCR，确定了内参基因的循环数，但是内参基因额亮度一直不好调整，需要调整模板CDNA的浓度，但是工作量太大了，我想问一下有没有哪位大侠知道如何快速调整CDNA的模板量，从而使得内参基因在选定的扩增循环数内亮度相同呢？不胜感激。@西瓜@biostar2009

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生命不息奋斗不止

1楼2014-05-18 17:27:22

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冷雁孤旅

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引用回帖:

3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-05-18 20:07:07
1. 提取的RNA要测定浓度，然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA（之所以稀释RNA，是为了在反转录时减小加样误差）
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率，如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话，需 ...

非常感谢最开始的RNA没有很好的调到一致的浓度，现在想要直接测定CDNA的浓度来调整模板量不知道可行度高不高