应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于半定量PCR的内参调节问题
51/1返回列表
查看: 3693  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

[求助] 关于半定量PCR的内参调节问题 已有5人参与

最近在做半定量PCR，确定了内参基因的循环数，但是内参基因额亮度一直不好调整，需要调整模板CDNA的浓度，但是工作量太大了，我想问一下有没有哪位大侠知道如何快速调整CDNA的模板量，从而使得内参基因在选定的扩增循环数内亮度相同呢？不胜感激。@西瓜@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
生命不息奋斗不止
1楼 2014-05-18 17:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:30:19
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:17:26
1. 提取的RNA要测定浓度，然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA（之所以稀释RNA，是为了在反转录时减小加样误差）
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率，如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话，需要先校正PCR仪。
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-18 20:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冷雁孤旅(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:52:29
冷雁孤旅: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-05-18 23:27:27
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录，然后取相同体积的cDNA做内参，一般会齐
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-18 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-18 18:09:41
在你做逆转录是用相同量的RNA做逆转录，然后取相同体积的cDNA做内参，一般会齐

最开始提取的RNA，我测了RNA的浓度，浓度参差不齐，不好调整，我就直接都取了7ulRNA反转，现在半定量的内参亮度也不同，现在可i以测定反转录的CDNA的浓度 来补救么？我想要是CDNA的浓度相同的话，那么内参的扩增亮度是否也相同呢
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
4楼2014-05-18 23:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-05-18 20:07:07
1. 提取的RNA要测定浓度，然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA（之所以稀释RNA，是为了在反转录时减小加样误差）
3. PCR时取等量的cDNA

要注意PCR仪的扩增效率，如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话，需 ...

非常感谢  最开始的RNA没有很好的调到一致的浓度，现在想要直接测定CDNA的浓度来调整模板量  不知道可行度高不高
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
5楼2014-05-18 23:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 08:02 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 4/200 2026-11-12 07:34 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:07 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 06:50 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:47 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭