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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的条带P不出来！
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18252091017

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的条带P不出来！ 已有2人参与

本人最近一直在提RNA,逆转录，PCR，可是总是P不出来我的目的条带，换了两次引物（第一次从一篇中文文献中查到的，第二次从一篇英文文献中查到的），结果都P不出来。我拿我逆转录出来的cDNA去p别人的引物和内参，都能P出来，可P我自己的引物总是P不出来。请问各位，
1、是我引物的问题吗？可是换了两次了，还是不行。
2、我引物稀释没有在超净台里做，打开盖子之前先3500转离心5分钟，再用nuclease-free water稀释，这一步应该没问题吧？因为我也是同样方法稀释的内参，结果内参p出来了。
3、倘若是我引物问题，请问各位选取引物时是自己设计？还是文献中查找？
求各位大侠指点，谢谢各位了！

目的条带P不出来！
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-_副本.jpg


目的条带P不出来！-1
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-.JPG
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1楼 2014-05-08 15:33:33
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
18252091017(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:16:03
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样，有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 16:47:24
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18252091017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 16:47:24
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样，有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试？

怎么知道我的目的基因PKC-α在我养的细胞人源血管平滑肌细胞中的表达丰度呢？谢谢！
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3楼2014-05-09 09:52:14
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-09 12:44:17
引物自己设计啊，还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗
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4楼2014-05-09 11:48:35
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18252091017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 快乐农夫 at 2014-05-09 11:48:35
引物自己设计啊，还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗

因为实验室之前养的是鼠源血管平滑肌细胞，PKC-α是表达的。因为一些状况，现在养的是人源血管平滑肌细胞，想着应该也表达吧……
请问，怎么确定这种基因在不在我养的这种细胞中表达？
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5楼2014-05-09 15:35:14
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

查文献，不同种属表达情况可能不一样，不要想当然，可以多试几种不同来源的模板P
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6楼2014-05-09 18:17:06
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