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18252091017

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的条带P不出来! 已有2人参与

本人最近一直在提RNA,逆转录,PCR,可是总是P不出来我的目的条带,换了两次引物(第一次从一篇中文文献中查到的,第二次从一篇英文文献中查到的),结果都P不出来。我拿我逆转录出来的cDNA去p别人的引物和内参,都能P出来,可P我自己的引物总是P不出来。请问各位,
1、是我引物的问题吗?可是换了两次了,还是不行。
2、我引物稀释没有在超净台里做,打开盖子之前先3500转离心5分钟,再用nuclease-free water稀释,这一步应该没问题吧?因为我也是同样方法稀释的内参,结果内参p出来了。
3、倘若是我引物问题,请问各位选取引物时是自己设计?还是文献中查找?
求各位大侠指点,谢谢各位了!

目的条带P不出来!
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-_副本.jpg


目的条带P不出来!-1
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-.JPG
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18252091017

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 16:47:24
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样,有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试?

怎么知道我的目的基因PKC-α在我养的细胞人源血管平滑肌细胞中的表达丰度呢?谢谢!
3楼2014-05-09 09:52:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
18252091017(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:16:03
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样,有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 16:47:24
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-09 12:44:17
引物自己设计啊,还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗
4楼2014-05-09 11:48:35
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18252091017

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 快乐农夫 at 2014-05-09 11:48:35
引物自己设计啊,还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗

因为实验室之前养的是鼠源血管平滑肌细胞,PKC-α是表达的。因为一些状况,现在养的是人源血管平滑肌细胞,想着应该也表达吧……
请问,怎么确定这种基因在不在我养的这种细胞中表达?
5楼2014-05-09 15:35:14
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