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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的条带P不出来！
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18252091017

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的条带P不出来！ 已有2人参与

本人最近一直在提RNA,逆转录，PCR，可是总是P不出来我的目的条带，换了两次引物（第一次从一篇中文文献中查到的，第二次从一篇英文文献中查到的），结果都P不出来。我拿我逆转录出来的cDNA去p别人的引物和内参，都能P出来，可P我自己的引物总是P不出来。请问各位，
1、是我引物的问题吗？可是换了两次了，还是不行。
2、我引物稀释没有在超净台里做，打开盖子之前先3500转离心5分钟，再用nuclease-free water稀释，这一步应该没问题吧？因为我也是同样方法稀释的内参，结果内参p出来了。
3、倘若是我引物问题，请问各位选取引物时是自己设计？还是文献中查找？
求各位大侠指点，谢谢各位了！

目的条带P不出来！
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-_副本.jpg


目的条带P不出来！-1
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-.JPG
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1楼 2014-05-08 15:33:33
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-09 12:44:17
引物自己设计啊，还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-09 11:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

查文献，不同种属表达情况可能不一样，不要想当然，可以多试几种不同来源的模板P
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-09 18:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
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