24小时热门版块排行榜    

查看: 1431  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

18252091017

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的条带P不出来! 已有2人参与

本人最近一直在提RNA,逆转录,PCR,可是总是P不出来我的目的条带,换了两次引物(第一次从一篇中文文献中查到的,第二次从一篇英文文献中查到的),结果都P不出来。我拿我逆转录出来的cDNA去p别人的引物和内参,都能P出来,可P我自己的引物总是P不出来。请问各位,
1、是我引物的问题吗?可是换了两次了,还是不行。
2、我引物稀释没有在超净台里做,打开盖子之前先3500转离心5分钟,再用nuclease-free water稀释,这一步应该没问题吧?因为我也是同样方法稀释的内参,结果内参p出来了。
3、倘若是我引物问题,请问各位选取引物时是自己设计?还是文献中查找?
求各位大侠指点,谢谢各位了!

目的条带P不出来!
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-_副本.jpg


目的条带P不出来!-1
0423  21号cDNA PCR vegf---RNA-.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

查文献,不同种属表达情况可能不一样,不要想当然,可以多试几种不同来源的模板P
6楼2014-05-09 18:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
18252091017(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:16:03
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样,有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-08 16:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18252091017

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 16:47:24
你的基因在你所提取的组织的表达丰度怎么样,有没有换换不用组织来源的RNA做逆转录然后再PCR试试?

怎么知道我的目的基因PKC-α在我养的细胞人源血管平滑肌细胞中的表达丰度呢?谢谢!
3楼2014-05-09 09:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-09 12:44:17
引物自己设计啊,还有你确定你要P的基因在你提取的组织样本中是表达的吗
4楼2014-05-09 11:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 05:13 by winsaint
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 3/150 2026-08-28 00:49 by 3RAFyYXYSwGS
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
请填处理意见