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同一菌种用细菌和真菌引物都跑出了条带,谁能给解释一下?
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我叫李四
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同一菌种用细菌和真菌引物都跑出了条带,谁能给解释一下?
已有3人参与
第一孔为2k marker
第二孔为 阴性对照
第三四五孔为同一菌株,
分别用的细菌和真菌引物,结果都有条带
哪位能给解释一下啊??
5.1 PCR产物电泳图.png
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1楼
2014-05-01 20:35:51
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我叫李四
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8楼
:
Originally posted by
DoRbIr
at 2014-05-02 22:30:38
我也觉得阴性对照里已经有污染了,你阴性对照加的是真菌引物吧?有没有细菌引物的阴性对照啊。
我今天又跑了一次,换了一管新的细菌引物,新的超纯水,还是有细菌条带出现
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9楼
2014-05-03 22:18:52
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yuren2009
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【答案】应助回帖
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首先阴性都有条带肯定是DNA有污染,目标菌真菌还是细菌?引物都是通用引物?
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2楼
2014-05-01 22:56:45
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2楼
:
Originally posted by
yuren2009
at 2014-05-01 22:56:45
首先阴性都有条带肯定是DNA有污染,目标菌真菌还是细菌?引物都是通用引物?
阴性对照里面都没加DNA样品,只加了PCR mix 超纯水,和真菌ITS引物
目标菌是什么还没鉴定呢,
细菌引物 1492r和27 真菌用的ITS引物,都是通用引物
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3楼
2014-05-02 08:21:16
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yuren2009
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【答案】应助回帖
你那个在同一位置上出现的条带可能是DNA污染也有可能点样飘了。细菌和真菌通用引物反应条件不一样,细菌至少1.5min去延伸,真菌1min足够了,还有要考虑循环次数这些都有可能增加杂带可能。
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4楼
2014-05-02 09:50:24
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