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1楼2014-05-01 20:35:51

yuren2009

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【答案】应助回帖

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首先阴性都有条带肯定是DNA有污染，目标菌真菌还是细菌？引物都是通用引物？

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2楼2014-05-01 22:56:45

我叫李四

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引用回帖:

2楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-01 22:56:45
首先阴性都有条带肯定是DNA有污染，目标菌真菌还是细菌？引物都是通用引物？

阴性对照里面都没加DNA样品，只加了PCR mix 超纯水，和真菌ITS引物
目标菌是什么还没鉴定呢，
细菌引物 1492r和27 真菌用的ITS引物，都是通用引物

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3楼2014-05-02 08:21:16

yuren2009

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【答案】应助回帖

你那个在同一位置上出现的条带可能是DNA污染也有可能点样飘了。细菌和真菌通用引物反应条件不一样，细菌至少1.5min去延伸，真菌1min足够了，还有要考虑循环次数这些都有可能增加杂带可能。

学习使你立于不败之地

4楼2014-05-02 09:50:24

我叫李四

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引用回帖:

4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-02 09:50:24
你那个在同一位置上出现的条带可能是DNA污染也有可能点样飘了。细菌和真菌通用引物反应条件不一样，细菌至少1.5min去延伸，真菌1min足够了，还有要考虑循环次数这些都有可能增加杂带可能。

两种引物都是用1min跑的，细菌条带凉，真菌的很暗。样飘什么意思？？

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5楼2014-05-02 13:36:46