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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 同一菌种用细菌和真菌引物都跑出了条带，谁能给解释一下？
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我叫李四

金虫 (正式写手)

[求助] 同一菌种用细菌和真菌引物都跑出了条带，谁能给解释一下？ 已有3人参与

第一孔为2k marker
第二孔为 阴性对照
第三四五孔为同一菌株，
            分别用的细菌和真菌引物，结果都有条带
            哪位能给解释一下啊？？

同一菌种用细菌和真菌引物都跑出了条带，谁能给解释一下？
5.1 PCR产物电泳图.png
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性别男身高175cm体重70kg
1楼 2014-05-01 20:35:51
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先阴性都有条带肯定是DNA有污染，目标菌真菌还是细菌？引物都是通用引物？
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学习使你立于不败之地
2楼2014-05-01 22:56:45
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我叫李四

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-01 22:56:45
首先阴性都有条带肯定是DNA有污染，目标菌真菌还是细菌？引物都是通用引物？

阴性对照里面都没加DNA样品，只加了PCR mix 超纯水，和真菌ITS引物
目标菌是什么还没鉴定呢，
细菌引物 1492r和27  真菌用的ITS引物，都是通用引物
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性别男身高175cm体重70kg
3楼2014-05-02 08:21:16
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个在同一位置上出现的条带可能是DNA污染也有可能点样飘了。细菌和真菌通用引物反应条件不一样，细菌至少1.5min去延伸，真菌1min足够了，还有要考虑循环次数这些都有可能增加杂带可能。
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学习使你立于不败之地
4楼2014-05-02 09:50:24
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我叫李四

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-05-02 09:50:24
你那个在同一位置上出现的条带可能是DNA污染也有可能点样飘了。细菌和真菌通用引物反应条件不一样，细菌至少1.5min去延伸，真菌1min足够了，还有要考虑循环次数这些都有可能增加杂带可能。

两种引物都是用1min跑的，细菌条带凉，真菌的很暗。样飘 什么意思？？
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性别男身高175cm体重70kg
5楼2014-05-02 13:36:46
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yuren2009

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 我叫李四 at 2014-05-02 13:36:46
两种引物都是用1min跑的，细菌条带凉，真菌的很暗。样飘 什么意思？？...

飘出点样孔了。
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学习使你立于不败之地
6楼2014-05-02 13:43:17
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ych518

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能你的菌根本就不纯

[ 发自小木虫客户端 ]
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假单胞菌
7楼2014-05-02 21:07:06
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也觉得阴性对照里已经有污染了，你阴性对照加的是真菌引物吧？有没有细菌引物的阴性对照啊。
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8楼2014-05-02 22:30:38
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我叫李四

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by DoRbIr at 2014-05-02 22:30:38
我也觉得阴性对照里已经有污染了，你阴性对照加的是真菌引物吧？有没有细菌引物的阴性对照啊。

我今天又跑了一次，换了一管新的细菌引物，新的超纯水，还是有细菌条带出现
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性别男身高175cm体重70kg
9楼2014-05-03 22:18:52
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我叫李四

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ych518 at 2014-05-02 21:07:06
可能你的菌根本就不纯

菌不纯 阴性对照都没加模板啊
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性别男身高175cm体重70kg
10楼2014-05-03 22:20:39
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