24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2289  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体已有7人参与

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体。
其中很亮的三个是内参,从右到左依此是四个不同引物,跑了三个平行,可是全都是引物二聚体。
反应程序:94℃  5min
                 94℃   50s
                 52℃   1min      
                 72℃   1.5min     35cycles
                 72℃   10min
                  8℃   
    目的片段长度: 右一:678bp, 右二:1261bp,右三:1514bp,右四:425bp.
   PS:引物是老师帮忙设计的,应该没什么问题,可就是跑不出来。老师也帮忙优化了一次体系,还是没出来。
还有模板用内参跑出来很亮,有没有可能是模板的问题?
  求各位大侠给个建议。

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体
dell 2014-04-30 15 时 46 分.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香! 2014-05-03 23:28:25
用touch down试试吧,我以前扩一个不怎么好扩的基因就是用它扩出来的

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-05-03 23:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:36
引物设计有没有问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-30 18:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

胶放反了!!!引物可能需要重新设计了
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-04-30 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:50
DNA 模板应该没有问题,你的control可以P出来
那就是你引物设计的问题了吧,还有,你的退火条件,是按照你设计引物的退火温度,还是就是设定在52呢?

如果不行,可以尝试touch down,或者,在反应体系中加3%的DMSO看看。
4楼2014-05-01 08:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见