24小时热门版块排行榜    

查看: 2836  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dingcong1216

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体 已有7人参与

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体。
其中很亮的三个是内参,从右到左依此是四个不同引物,跑了三个平行,可是全都是引物二聚体。
反应程序:94℃  5min
                 94℃   50s
                 52℃   1min      
                 72℃   1.5min     35cycles
                 72℃   10min
                  8℃   
    目的片段长度: 右一:678bp, 右二:1261bp,右三:1514bp,右四:425bp.
   PS:引物是老师帮忙设计的,应该没什么问题,可就是跑不出来。老师也帮忙优化了一次体系,还是没出来。
还有模板用内参跑出来很亮,有没有可能是模板的问题?
  求各位大侠给个建议。

最近做pcr,内参出来了,目的片段却一直出不来,只有引物二聚体
dell 2014-04-30 15 时 46 分.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxh1234

银虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

重新合成或设计引物试试看
7楼2014-05-03 21:27:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:36
引物设计有没有问题?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-30 18:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

胶放反了!!!引物可能需要重新设计了
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-04-30 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dingcong1216(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-01 20:45:50
DNA 模板应该没有问题,你的control可以P出来
那就是你引物设计的问题了吧,还有,你的退火条件,是按照你设计引物的退火温度,还是就是设定在52呢?

如果不行,可以尝试touch down,或者,在反应体系中加3%的DMSO看看。
4楼2014-05-01 08:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +6 yuleib84 2026-08-19 7/350 2026-08-21 09:24 by zxg7980
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 让我中一个面上吧! +9 大萍1987 2026-08-20 11/550 2026-08-21 08:19 by littlezl
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见