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yhh狙击手新

金虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达载体构建 已有2人参与

构建原核表达载体过程中的问题:
       PCR得到的基因比目的基因稍大?
       胶回收后的目的片段较弱?
       连接转化效率不高,对照组转化效率很好?
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yhh狙击手新(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-29 21:15:49
1、PCR得到的基因比目的基因稍大?这个可以通过克隆进行测序进行鉴定。
2、胶回收后的目的片段较弱?这个一般都是这种情况,不影响。
3、连接转化效率不高,对照组转化效率很好?可能目的基因与载体的连接效率低。
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-04-29 18:09:35
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.可以测序,agarose跑出来有时候也不是特别准确

2.回收效率也就一半左右,起始的DNA量最好够高,而且,回收过柱子前,一般情况下,我加3-5ul的3M NaOAc,确保pH比较低,这样可以提高柱子的DNA结合效率

3.电转还是化学转?连接的转化菌落数一般来说要低于质粒的对照的,这个也很正常,不过只要有一个正确的就够了,对吧?
3楼2014-04-30 05:49:26
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