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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体目的片段终止密码子后出现ATG
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体目的片段终止密码子后出现ATG

在构建原核表达载体时扩增获得的片段有完整的编码框，但是由于引物设计的原因在连入载体的片段TGA（end codon）后不远处出现了ATG，请问这个ATG是否会对原核表达载体的表达产生影响？它会成为一个新的起始密码子对其后面的序列进行转录翻译表达吗？
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1楼2013-08-21 09:01:57
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-21 10:32:46
一般不会，除非中间再出现RBS，TATA框等类似结构
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2楼2013-08-21 09:03:26
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-08-21 10:32:54
在终止密码子后面出现ATG不是什么问题。
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3楼2013-08-21 09:17:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
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yangjianchen: 金币+3, 很感谢！ 2013-08-22 09:25:09
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:43:31
可能会有产物。因为原核表达载体往往是用强启动子，在没有终止子序列的情况下，终止密码子不足以使核糖体脱落。不过，在终止密码子后面的产物不会与目标基因的产物合并，所以对目标基因的表达影响不大。
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4楼2013-08-21 11:07:49
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忘性大啊

新虫 (初入文坛)
无影响
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5楼2013-08-21 11:28:01
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-21 11:07:49
可能会有产物。因为原核表达载体往往是用强启动子，在没有终止子序列的情况下，终止密码子不足以使核糖体脱落。不过，在终止密码子后面的产物不会与目标基因的产物合并，所以对目标基因的表达影响不大。

谢谢啊！我觉得还是考虑不连后面的非编码区了，但是前面想扩增到TGA不容易啊，高GC。。。
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6楼2013-08-22 09:24:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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yangjianchen: 金币+1 2013-08-23 09:48:58
引用回帖:
6楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-08-22 09:24:58
谢谢啊！我觉得还是考虑不连后面的非编码区了，但是前面想扩增到TGA不容易啊，高GC。。。...

如果后面有ATG，但序列不长应该没事的。
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7楼2013-08-22 22:33:53
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547star

木虫 (著名写手)
★
yangjianchen: 金币+1 2013-08-23 09:47:53
有可能出现通读的情况。
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8楼2013-08-22 23:17:20
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 547star at 2013-08-22 23:17:20
有可能出现通读的情况。

通读是什么意思？我的意思是这个ATG之前有TGA，难道之前的这个TGA不会终止编码吗？
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9楼2013-08-23 09:48:40
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-22 22:33:53
如果后面有ATG，但序列不长应该没事的。...

恩，先尝试下，尽量把后面舍弃掉。。。谢谢
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10楼2013-08-23 09:49:28
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huoyongting

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果ATG离TGA很近，然后ATG后面的编码框比较长，会有些问题的，我以前碰到过几次重新起始的
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11楼2013-08-23 17:25:35
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lihuahan

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我也在做原核表达载体构建，是个新手，有个问题想请教一下，我现在有目的基因的CDS序列，在设计引物的时候是应该根据目的基因的CDS序列还是ORF序列尼？如果是用ORF的话，我分析了一下CDS序列中有5段ORF，是选取一段ORF还是5段ORF片段尼？如果是5段都用的话，那每段中的终止密码子会不会影响后期蛋白的表达？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-05-04 10:27:37
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我又当如何

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-21 11:07:49
可能会有产物。因为原核表达载体往往是用强启动子，在没有终止子序列的情况下，终止密码子不足以使核糖体脱落。不过，在终止密码子后面的产物不会与目标基因的产物合并，所以对目标基因的表达影响不大。

你说的很不清楚，强启动子是指他的转录能力很强，这能跟终止密码子使核糖体脱不脱落有关吗
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13楼2018-02-01 15:11:58
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