[求助] 原核表达载体构建已有2人参与

构建原核表达载体过程中的问题：
   PCR得到的基因比目的基因稍大？
   胶回收后的目的片段较弱？
   连接转化效率不高，对照组转化效率很好？

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1楼 2014-04-29 15:22:30

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西门吹雪170

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1、PCR得到的基因比目的基因稍大？这个可以通过克隆进行测序进行鉴定。
2、胶回收后的目的片段较弱？这个一般都是这种情况，不影响。
3、连接转化效率不高，对照组转化效率很好？可能目的基因与载体的连接效率低。

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2楼2014-04-29 18:09:35

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meng_xu

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【答案】应助回帖

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1.可以测序，agarose跑出来有时候也不是特别准确

2.回收效率也就一半左右，起始的DNA量最好够高，而且，回收过柱子前，一般情况下，我加3-5ul的3M NaOAc，确保pH比较低，这样可以提高柱子的DNA结合效率

3.电转还是化学转？连接的转化菌落数一般来说要低于质粒的对照的，这个也很正常，不过只要有一个正确的就够了，对吧？

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3楼2014-04-30 05:49:26

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