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hhl1230

新虫 (小有名气)

[求助] 我的条带小于目的条带。。。求助。。。。 已有5人参与

我的目的条带在500多一点,但是跑出来是小于500的,问过师兄师姐,好像不是引物二聚体。求各位前辈指教。PCR条件:
预变性:95℃,5min,
变性:95℃,30s,
退火:60.5℃,30s,
延伸:72℃,30s,
循环:34
再延伸:72℃,10min,
12℃forever
体积:10μl--------上游引物:0.4;
                            下游引物:0.4
                             模板:1
                              水:3.2
                              MIX:5
图中:12345为同样的引物,1,23,45分别为不同的模板

我的条带小于目的条带。。。求助。。。。
2.jpg
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hhl1230

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-04-24 08:08:31
提高退火温度,最好做一个梯度PCR,一般每1000bp延伸时间为1min,你的目的条带大于500的话,延伸时间也适当延长一下,比如2楼说的40s

嗯嗯。。
9楼2014-04-24 20:16:27
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查看全部 16 个回答

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-23 23:42:48
1、可适当提高退火温度增加特异性,2、胶跑的太烂,完全分不清楚,3、可以回收片段测序确认
2楼2014-04-23 22:05:56
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-23 23:42:54
退火温度可以再高一点,延伸40秒,胶可以用2%的,跑的时间长一些,50分钟左右。
3楼2014-04-23 22:53:52
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
割胶测序不就行了
借口很贱,,,
4楼2014-04-23 23:39:19
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