24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2157  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hhl1230

新虫 (小有名气)

[求助] 我的条带小于目的条带。。。求助。。。。 已有5人参与

我的目的条带在500多一点,但是跑出来是小于500的,问过师兄师姐,好像不是引物二聚体。求各位前辈指教。PCR条件:
预变性:95℃,5min,
变性:95℃,30s,
退火:60.5℃,30s,
延伸:72℃,30s,
循环:34
再延伸:72℃,10min,
12℃forever
体积:10μl--------上游引物:0.4;
                            下游引物:0.4
                             模板:1
                              水:3.2
                              MIX:5
图中:12345为同样的引物,1,23,45分别为不同的模板

我的条带小于目的条带。。。求助。。。。
2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-23 23:42:54
退火温度可以再高一点,延伸40秒,胶可以用2%的,跑的时间长一些,50分钟左右。
3楼2014-04-23 22:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-23 23:42:48
1、可适当提高退火温度增加特异性,2、胶跑的太烂,完全分不清楚,3、可以回收片段测序确认
2楼2014-04-23 22:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
割胶测序不就行了
借口很贱,,,
4楼2014-04-23 23:39:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提高退火温度,最好做一个梯度PCR,一般每1000bp延伸时间为1min,你的目的条带大于500的话,延伸时间也适当延长一下,比如2楼说的40s
5楼2014-04-24 08:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +20 那个噜子 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 09:50 by liuhuiying09
[考研] 化学工程与技术324调剂 +21 孙常华 2026-04-09 22/1100 2026-04-10 09:49 by 690616278
[考研] 08工学 309分求调剂 +6 Yin DY 2026-04-08 6/300 2026-04-10 09:18 by Delta2012
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +5 白云123456789 2026-04-09 7/350 2026-04-09 21:03 by 白云123456789
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +9 木子念晞 2026-04-05 9/450 2026-04-09 20:04 by vgtyfty
[考研] 301求调剂 +10 细胞相关蛋白 2026-04-03 10/500 2026-04-08 10:36 by tjzhao
[考研] 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-04 4/200 2026-04-08 08:41 by barlinike
[考研] 338求调剂 +5 小猪红色 678 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:18 by 乔哒哒哒
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 081700,311,求调剂 +17 冬十三 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:50 by Sammy2
[考研] 材料专硕322分 +10 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 21:22 by 学员8dgXkO
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +6 ioodiiij 2026-04-04 6/300 2026-04-05 10:09 by guoweigw
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二!! 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见