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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR电泳图请帮忙分析
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lumy790101

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR电泳图请帮忙分析 已有4人参与

请各位大侠帮我分析这是 什么原因，ISSR-PCR电泳图

PCR电泳图请帮忙分析
_20140422141330.jpg
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1楼 2014-04-23 09:33:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

凌枫miracle

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可否先将你的反应体系和条件贴出来，方便大家指点你的错误。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-04-23 13:29:40
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物太多了吧，还有模版最好测下浓度。
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学习使你立于不败之地
5楼2014-04-23 14:53:17
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普通回帖

lumy790101

新虫 (初入文坛)
150V电压，1.8%琼脂糖电泳1h
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2楼2014-04-23 09:35:33
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lumy790101

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌枫miracle at 2014-04-23 13:29:40
你可否先将你的反应体系和条件贴出来，方便大家指点你的错误。

体系是25ul，Mix12.5ul，引物2ul，模板1ul，用dd水补平.94度5min，94度45s,退火40s,72度70s，72度10min,35个循环。
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4楼2014-04-23 14:43:11
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scsc1111

新虫 (初入文坛)
我是刚注册的为什么看不到图片呢，是我的级别低的原因吗
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6楼2014-04-24 11:08:33
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lumy790101

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-04-23 14:53:17
引物太多了吧，还有模版最好测下浓度。

体系是之前筛选的，25ul体系中引物0.8uM,模板是20nG
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7楼2014-04-24 18:20:59
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lumy790101: 金币+3, ★有帮助 2014-04-24 20:44:41
这叫目的物弥散，是由于你的引物不够特异，扩增条件不当导致的，改改吧
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8楼2014-04-24 19:42:22
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lumy790101

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 永远不知道 at 2014-04-24 19:42:22
这叫目的物弥散，是由于你的引物不够特异，扩增条件不当导致的，改改吧

是说我重新设计反应程序吗？
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9楼2014-04-25 10:47:59
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zkz38210098

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物浓度太高了，1μl的量就可以了（0.4μM）。引物特异性不够，建议提高退火温度试一试。还有你的片段长度是多少，延伸时间也要考虑，一般1000bp/min。【个人看法】
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10楼2014-04-27 09:49:35
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