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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩增条带很弱，该怎么解决呢
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前路知己

木虫 (正式写手)

[求助] 扩增条带很弱，该怎么解决呢 已有2人参与

最近PCR扩增了一个1800bp左右的片段，52℃杂带一堆，54℃比较特异了，但是经过30个循环还是条带很弱，下图是与400bp片段的对比，我是72℃延伸1min，求助高手如何解决？是不是需要增加循环数呢？谢谢！
扩增条带很弱，该怎么解决呢
注：前四个泳道是用的不同浓度DNA，54℃的扩增结果，泳道5是其它400bp的对照
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1楼 2014-04-09 10:47:19
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
前路知己: 金币+2, ★有帮助, 非常感谢，马上开始试验 2014-04-09 11:50:29
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-09 14:18:58
以你的第二个泳道的产物为模板，退火温度设到58度，延长照样1min，循环到32个，再做一次PCR，模板加1ul就可以了。
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2楼2014-04-09 11:00:56
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题可能有几个原因：
1.PCR温度不合适，适当调整
2.模版本身的浓度或者说质量是否可以
3.一般30个循环是可以的
4.对于延伸时间，我觉得应该没问题，或者适当长一些
5.还需要注意，在PCR加样的过程中，药品的量是否合理，是否加的正确
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3楼2014-04-09 21:04:50
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