24小时热门版块排行榜    

查看: 2272  |  回复: 8

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

[求助] 求助:ISSR扩增条带问题解决 已有1人参与

各位大神好,本人最近在做ISSR的分子标记,有几个问题想求助:1、扩增不同地区的植物样本如图,扩增产物跑胶后,总是看着有白色的拖尾,且条带之间不如文章上附图那么清晰可辨,不知道是什么原因;2、跑出来的条带会呈现成哑铃型,有时候一排胶跑的还呈现波浪状状,不明白什么原因,请大神指点!
求助:ISSR扩增条带问题解决
hp 2014-01-14.jpg


求助:ISSR扩增条带问题解决-1
hp 2014-01-16 xjy-pcr-4.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我努力,我坚持,我成功!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xujingyuanxu: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-02-28 21:51:15
哑铃状第一是上样量少了,还有就是胶做好的时间比较长,有点干了。您可以先把胶放在电泳池中泡一下再上样,可能会好一点。
拖尾是由于PCR的问题,有些污染吧。您看您有的梳孔处都有亮点,这很可能是某些污染。
2楼2014-02-27 23:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 23:08:06
哑铃状第一是上样量少了,还有就是胶做好的时间比较长,有点干了。您可以先把胶放在电泳池中泡一下再上样,可能会好一点。
拖尾是由于PCR的问题,有些污染吧。您看您有的梳孔处都有亮点,这很可能是某些污染。

谢谢您!我在提取DNA的过程中,除蛋白用的是氯仿—异戊醇,没有加酚,是不是处理蛋白不彻底啊?其次,我没有用RNA酶处理,您觉得有什么影响么?RNA会不会放一段时间就自动降解了啊?第三,我PCR之前模板只是上了电泳,和marker进行对比,没有用吸光度测浓度,另外模板有时会特别亮,梳孔处有亮点,是因为蛋白还是多糖杂质呢?稀释一下可以么?谢谢您的帮忙!
我努力,我坚持,我成功!
3楼2014-02-28 21:50:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2014-02-28 21:50:14
谢谢您!我在提取DNA的过程中,除蛋白用的是氯仿—异戊醇,没有加酚,是不是处理蛋白不彻底啊?其次,我没有用RNA酶处理,您觉得有什么影响么?RNA会不会放一段时间就自动降解了啊?第三,我PCR之前模板只是上了电 ...

您PCR中加入的DNA模版量已经很低了,再加上反应体系进一步稀释。有杂质什么的也都被稀释了吧。。。。
没有用RNA酶处理没关系,不影响ISSR实验结果。另外您说的RNA降解一般都这么说,应该会被降解了吧,不过不好说
跑DNA时梳孔处的亮点可能蛋白多糖多酚什么的都有可能,如果不影响实验结果,就不用纠结。
我觉得您的关键点是在PCR上,做ISSR时就是DNA提的再烂都能做出来的,别纠结提DNA的方法了。好好看看PCR反应有没有可能引入什么污染。尤其是水!
4楼2014-03-01 06:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-03-01 06:28:30
您PCR中加入的DNA模版量已经很低了,再加上反应体系进一步稀释。有杂质什么的也都被稀释了吧。。。。
没有用RNA酶处理没关系,不影响ISSR实验结果。另外您说的RNA降解一般都这么说,应该会被降解了吧,不过不好说 ...

哦!原来是这样子啊,谢谢您!我想知道PCR反应一般可能会有哪些污染啊?例如说是PCR试剂交叉使用污染、实验室空气不干净、加样的时候枪头污染,还是有什么特别容易引入污染的?我是新人,还望指点!另外,我们的灭菌双蒸水都是灭菌后装在2ml的离心管里,然后放在-20度的冰箱里冻存,用的时候提前拿出来,当然一次没用完的就放在4度冰箱里保存,下次再用,这样是不是会污染水啊?
我努力,我坚持,我成功!
5楼2014-03-01 21:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张-君

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2014-03-01 21:42:40
哦!原来是这样子啊,谢谢您!我想知道PCR反应一般可能会有哪些污染啊?例如说是PCR试剂交叉使用污染、实验室空气不干净、加样的时候枪头污染,还是有什么特别容易引入污染的?我是新人,还望指点!另外,我们的灭 ...

您好,我刚接触ISSR,但是一直p不出东西,跑不出条带来,能知道下您的PCR加样的体系吗?多谢
我思故我在
6楼2014-11-10 14:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫夏的亲妈

新虫 (初入文坛)

同求,我提取的DNA没有问题,但是PCR出来的结果不尽如人意,只有一条带,想问这是怎么一回事
7楼2014-12-03 12:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 莫夏的亲妈 at 2014-12-03 12:57:21
同求,我提取的DNA没有问题,但是PCR出来的结果不尽如人意,只有一条带,想问这是怎么一回事

我觉得还是你的引物可能有问题!根据文献上的实验条件试试
我努力,我坚持,我成功!
8楼2014-12-04 12:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫夏的亲妈

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2014-12-04 12:56:40
我觉得还是你的引物可能有问题!根据文献上的实验条件试试...

谢谢,我换了另一种引物,就是有条带,但不是好多,只有两三条,能说明问题吗?还有做issr的酶有特殊要求吗
9楼2014-12-18 14:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xujingyuanxu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +3 睿08 2026-03-17 5/250 2026-03-17 22:01 by 睿08
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +5 慕寒mio 2026-03-16 5/250 2026-03-17 21:31 by hmn_wj
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见