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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 重组蛋白在低浓度咪唑洗脱怎么办
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miclebibi

银虫 (小有名气)

[求助] 重组蛋白在低浓度咪唑洗脱怎么办 已有2人参与

我的重组蛋白可以挂上镍柱，流穿液中没有目的蛋白，可是在做梯度洗脱的时候，在20mM咪唑浓度下目的蛋白跟杂蛋白一起洗脱了，还能降低咪唑浓度吗？求解决方法
十分感激
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1楼 2014-04-01 18:28:27
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上镍柱结合能力这么弱还真不常见，要真这样就继续降低咪唑浓度吧！
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2楼2014-04-01 19:57:05
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woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况的话，两个方案：
有其他柱子的话，在Ni柱洗脱后再用其他柱子分离

没有其他柱子的话：
不要使用咪唑梯度，使用pH梯度，你可以看看Qiagen的说明书，里面有pH梯度洗涤Ni柱的详细配方和流程
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3楼2014-04-02 10:30:10
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miclebibi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by woolley at 2014-04-02 10:30:10
这种情况的话，两个方案：
有其他柱子的话，在Ni柱洗脱后再用其他柱子分离

没有其他柱子的话：
不要使用咪唑梯度，使用pH梯度，你可以看看Qiagen的说明书，里面有pH梯度洗涤Ni柱的详细配方和流程

感谢
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4楼2014-04-02 16:07:49
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miclebibi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-01 19:57:05
上镍柱结合能力这么弱还真不常见，要真这样就继续降低咪唑浓度吧！

感谢
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5楼2014-04-02 16:08:01
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