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miclebibi

银虫 (小有名气)

[求助] 重组蛋白在低浓度咪唑洗脱怎么办 已有2人参与

我的重组蛋白可以挂上镍柱,流穿液中没有目的蛋白,可是在做梯度洗脱的时候,在20mM咪唑浓度下目的蛋白跟杂蛋白一起洗脱了,还能降低咪唑浓度吗?求解决方法
十分感激
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上镍柱结合能力这么弱还真不常见,要真这样就继续降低咪唑浓度吧!
2楼2014-04-01 19:57:05
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woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况的话,两个方案:
有其他柱子的话,在Ni柱洗脱后再用其他柱子分离

没有其他柱子的话:
不要使用咪唑梯度,使用pH梯度,你可以看看Qiagen的说明书,里面有pH梯度洗涤Ni柱的详细配方和流程
3楼2014-04-02 10:30:10
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miclebibi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by woolley at 2014-04-02 10:30:10
这种情况的话,两个方案:
有其他柱子的话,在Ni柱洗脱后再用其他柱子分离

没有其他柱子的话:
不要使用咪唑梯度,使用pH梯度,你可以看看Qiagen的说明书,里面有pH梯度洗涤Ni柱的详细配方和流程

感谢
4楼2014-04-02 16:07:49
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miclebibi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-01 19:57:05
上镍柱结合能力这么弱还真不常见,要真这样就继续降低咪唑浓度吧!

感谢
5楼2014-04-02 16:08:01
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