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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

[求助] NI柱上咪唑洗脱方式

咪唑和ni结合能力强吗,用盐水能把咪唑洗脱下来吗,平衡液中20mmol咪唑和ni结合会达到饱和吗?咪唑比重组蛋白和NI的结合能力强,也是需要一定浓度的吧?
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jinglexlg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以前有类似的问题的吧 你搜下 先

我看到一个给你参考

http://muchong.com/html/201008/2291829.html
It's simple as a song.but hard for me.Any way,I am trying.
2楼2013-01-07 15:15:52
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

我想通了,关键一点咪唑和目的蛋白之间是竞争性洗脱,谁的竞争力强谁就和NI结合,不用管平衡液中低浓度咪唑和NI的结合,目的蛋白一上来都要让位。高浓度咪唑洗脱目的蛋白后,只需要用其他不含咪唑或者低浓度咪唑的buffer冲洗柱子,就可以降低柱上咪唑浓度,所以不用担心下次上样问题。
笑对人生,相信自己。
3楼2013-01-07 15:36:40
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

引用回帖:
3楼: Originally posted by grape114 at 2013-01-07 15:36:40
我想通了,关键一点咪唑和目的蛋白之间是竞争性洗脱,谁的竞争力强谁就和NI结合,不用管平衡液中低浓度咪唑和NI的结合,目的蛋白一上来都要让位。高浓度咪唑洗脱目的蛋白后,只需要用其他不含咪唑或者低浓度咪唑的b ...

上面理解错误,水是洗不掉咪唑的。实际是采用低PH值缓冲液洗脱NI柱,咪唑环上与NI结合的N原子质子化,与NI-NTA脱离。这样洗脱了咪唑,保证NI挂在柱上。
笑对人生,相信自己。
4楼2013-06-27 14:20:20
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