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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » NI柱上咪唑洗脱方式
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

[求助] NI柱上咪唑洗脱方式

咪唑和ni结合能力强吗，用盐水能把咪唑洗脱下来吗，平衡液中20mmol咪唑和ni结合会达到饱和吗？咪唑比重组蛋白和NI的结合能力强，也是需要一定浓度的吧？
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笑对人生，相信自己。
1楼 2013-01-07 13:24:58
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jinglexlg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前有类似的问题的吧 你搜下 先

我看到一个给你参考

http://muchong.com/html/201008/2291829.html
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It's simple as a song.but hard for me.Any way,I am trying.
2楼2013-01-07 15:15:52
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars
我想通了，关键一点咪唑和目的蛋白之间是竞争性洗脱，谁的竞争力强谁就和NI结合，不用管平衡液中低浓度咪唑和NI的结合，目的蛋白一上来都要让位。高浓度咪唑洗脱目的蛋白后，只需要用其他不含咪唑或者低浓度咪唑的buffer冲洗柱子，就可以降低柱上咪唑浓度，所以不用担心下次上样问题。
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笑对人生，相信自己。
3楼2013-01-07 15:36:40
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars
引用回帖:
3楼: Originally posted by grape114 at 2013-01-07 15:36:40
我想通了，关键一点咪唑和目的蛋白之间是竞争性洗脱，谁的竞争力强谁就和NI结合，不用管平衡液中低浓度咪唑和NI的结合，目的蛋白一上来都要让位。高浓度咪唑洗脱目的蛋白后，只需要用其他不含咪唑或者低浓度咪唑的b ...

上面理解错误，水是洗不掉咪唑的。实际是采用低PH值缓冲液洗脱NI柱，咪唑环上与NI结合的N原子质子化，与NI-NTA脱离。这样洗脱了咪唑，保证NI挂在柱上。
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笑对人生，相信自己。
4楼2013-06-27 14:20:20
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