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fuwadoudou金虫 (著名写手)
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聚酰胺装柱，洗脱
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本人第一次用聚酰胺柱子，实验室有聚酰胺粉，之前网上也看了参差不齐的资料。想知道整个流程是怎么做的。我现在醇提100g生药样品，然后用10g聚酰胺粉拌样，现在是想知道怎么装柱，要用聚酰胺粉多大量，然后是怎么上样，怎么洗脱？ 谢谢。详细解答  者以金币重赏。 |
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liupengp02
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新买的聚酰胺 取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱，最后用蒸馏水洗脱至pH中性，备用。 1、装柱：一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中，使其充分膨胀，然后装柱，让聚酰胺自由沉降；当用非极性溶剂系统时候，则用组分中低级性的溶剂装柱。 2、稀释适当浓度上样：一般每100ml聚酰胺上样1.5-2.5g，样品先用洗脱溶剂溶解，浓度为20%-30%。水溶性化合物直接上样；若提取物水溶性不好，则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶。 3、水洗：先用水洗脱。 4、醇洗：在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液，或氯仿、氯仿-甲醇，递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未被洗脱，可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱，分段收集。 5、找到最佳吸附比：先小量试验找到最佳吸附比。 6、放大：根据小试及最佳吸附比进行放大试验。 7、聚酰胺的回收：使用过的聚酰胺一般用5%氢氧化钠溶液洗涤，然后水洗，再用10%醋酸液洗，然后用蒸馏水洗至中性，即可。 聚酰胺柱层析的不足： 比如机械强度不大， 粒度不均匀，分离时流速较慢 一些小分子杂质混入的问题 采用的解决方案有： 1.装柱前先过筛 2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂质 3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度。 |
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fuwadoudou2楼2012-04-06 12:05:36
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很简单： 找一根中等大小的柱子，对于装多样聚酰胺，不必拘泥于课本教材上说的那么严格，大概有40厘米长或者30厘米长内径大于5厘米小于10厘米的柱子，拿聚酰胺袋直接装就是了，边装边用洗耳球在柱顶敲打，以便装实，看装的差不多了，在把你所拌的样品装上，离磨口有2-3厘米即可，放一层棉花，套上即可。 然后用水洗2-3个体积，各部位都可洗脱3-4个柱体积，即可。如果洗不干净，多洗几个柱体积，随机变化。 下来就是10%或者30%，40%。50%，70%。90%，乙醇水梯度洗脱，至于如何选梯度，自己决定，， 收集各部分，浓缩即可 |
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3楼2012-04-06 12:52:25
fuwadoudou
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| 哪有这么复杂，没必都要按书的弄。你就用水湿法装柱，然后不停的先用水洗，注意要洗到没有聚酰胺粉末出来为止。 |
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9楼2012-04-07 15:30:45
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