应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 聚酰胺装柱，洗脱
51/1返回列表
查看: 2707  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fuwadoudou

金虫 (著名写手)

[求助] 聚酰胺装柱，洗脱

本人第一次用聚酰胺柱子，实验室有聚酰胺粉，之前网上也看了参差不齐的资料。想知道整个流程是怎么做的。我现在醇提100g生药样品，然后用10g聚酰胺粉拌样，现在是想知道怎么装柱，要用聚酰胺粉多大量，然后是怎么上样，怎么洗脱？
谢谢。详细解答者以金币重赏。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

植化实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Troublemaker
1楼 2012-04-06 09:31:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-04-06 13:21:51
fuwadoudou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-04-08 09:26:50
很简单：

找一根中等大小的柱子，对于装多样聚酰胺，不必拘泥于课本教材上说的那么严格，大概有40厘米长或者30厘米长内径大于5厘米小于10厘米的柱子，拿聚酰胺袋直接装就是了，边装边用洗耳球在柱顶敲打，以便装实，看装的差不多了，在把你所拌的样品装上，离磨口有2-3厘米即可，放一层棉花，套上即可。

然后用水洗2-3个体积，各部位都可洗脱3-4个柱体积，即可。如果洗不干净，多洗几个柱体积，随机变化。
下来就是10%或者30%，40%。50%，70%。90%，乙醇水梯度洗脱，至于如何选梯度，自己决定，，
收集各部分，浓缩即可
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

fuwadoudou
精益求精
3楼2012-04-06 12:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

liupengp02

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-04-06 13:21:46
fuwadoudou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-04-08 09:28:26
新买的聚酰胺
    取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱，最后用蒸馏水洗脱至pH中性，备用。

1、装柱：一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中，使其充分膨胀，然后装柱，让聚酰胺自由沉降；当用非极性溶剂系统时候，则用组分中低级性的溶剂装柱。
2、稀释适当浓度上样：一般每100ml聚酰胺上样1.5-2.5g，样品先用洗脱溶剂溶解，浓度为20%-30%。水溶性化合物直接上样；若提取物水溶性不好，则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶。

3、水洗：先用水洗脱。
4、醇洗：在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液，或氯仿、氯仿-甲醇，递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未被洗脱，可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱，分段收集。
5、找到最佳吸附比：先小量试验找到最佳吸附比。
6、放大：根据小试及最佳吸附比进行放大试验。
7、聚酰胺的回收：使用过的聚酰胺一般用5%氢氧化钠溶液洗涤，然后水洗，再用10%醋酸液洗，然后用蒸馏水洗至中性，即可。

聚酰胺柱层析的不足：
比如机械强度不大，
粒度不均匀，分离时流速较慢
一些小分子杂质混入的问题
采用的解决方案有：
1.装柱前先过筛
2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂质
3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度。
赞一下(3人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

fuwadoudou
你不懂我，我不怪你
2楼2012-04-06 12:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuwadoudou

金虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liupengp02 at 2012-04-06 12:05:36:
新买的聚酰胺
    取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水 ...

这个不行啊，看到的都这样，有没有具体到多少g的，我都不知道怎么算拌样比，而且流速是多少呢？
赞一下 回复此楼
Troublemaker
4楼2012-04-06 15:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuwadoudou

金虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by anyluk at 2012-04-06 12:52:25:
很简单：

找一根中等大小的柱子，对于装多样聚酰胺，不必拘泥于课本教材上说的那么严格，大概有40厘米长或者30厘米长内径大于5厘米小于10厘米的柱子，拿聚酰胺袋直接装就是了，边装边用洗耳球在柱顶敲打，以便 ...

你这种是干法装柱吗？就跟干法装硅胶柱差不多吗？我有个疑问，你已经把样品装进去了，为啥还水洗那么多体积然后再洗脱，不怕样品被洗掉吗
赞一下 回复此楼
Troublemaker
5楼2012-04-06 15:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭