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正相柱与反相柱的洗脱顺序
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因基础知识不扎实,对正相柱与反相柱的洗脱顺序十分不解,求高手指教。。 使用时为了能够让组分依次洗脱出来,梯度洗脱流动相的极性是应该怎么变化,水和有机相的比例应该是怎么变化,原理是什么呀? 真希望各位大哥大姐能够帮帮我,谢谢,真的谢谢。 [ 来自科研家族 药物制剂 ] [ Last edited by TLC菜鸟 on 2011-11-15 at 21:32 ] |
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wanggch123
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2楼2011-11-15 22:32:24
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3楼2011-11-15 22:41:32
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【答案】应助回帖
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novus(金币+1): 谢谢交流! 2011-11-16 21:19:50
TLC菜鸟(金币+5): 为什么反相柱的洗脱顺序极性大的先出来呢?是什么原理呀 2011-11-18 18:49:47
novus(金币+1): 谢谢交流! 2011-11-16 21:19:50
TLC菜鸟(金币+5): 为什么反相柱的洗脱顺序极性大的先出来呢?是什么原理呀 2011-11-18 18:49:47
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1. 正相柱洗脱的时候组分是按照极性从小到大的顺序洗脱下来的,洗脱剂(如甲醇、乙腈、正己烷等)极性从小到大,常用填料为硅胶等; 反相柱洗脱的时候组分是按照极性从大到小的顺序洗脱的,洗脱剂(如甲醇-水)性从大到小选择,常用的填料有ODS等。 2. 差速迁移机制,分配色谱(分配系数)、吸附色谱(物理吸附)、离子交换色谱(离子交换)、空间排阻色谱(分子大小)各有不同。 |

4楼2011-11-16 11:36:26
【答案】应助回帖
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-11-20 10:53:06
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-11-20 10:53:06
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正相系统换反相系统注意事项 在液相色谱仪使用过程中,我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象,但由于使用操作不当,常常不注意间损坏了色谱柱,同时加重了液相色谱系统的污染,导致分析工作出现麻烦,现在将置换工作的基本流程列出,供用户参考: 1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现); 2. 卸掉硅胶柱,封好保存; 3. 将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次; 4.换甲醇(或已睛)冲洗系统20分钟(流速2ml/min) ,此期间空拨进样阀三次; 5. 安上反相色谱柱, 流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统,直到系统平衡; 6.进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复。 反相系统换正相系统的注意事项 反相系统换正相系统的注意事项 1.首先用甲醇(或已腈)将色谱系统包括反相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现); 2.卸掉反相柱,封好保存; 3.将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min),在这期间空拨进样阀三次; 4.换正己烷(硅胶柱)冲洗系统20分钟(流速2ml/min) , 此期间空拨进样阀三次; 5.安上硅胶色谱柱, 流速调到1ml/min,用正己烷冲洗系统,直到系统平衡; 6.进三针标准品检验面积﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复。 |
5楼2011-11-19 22:38:14
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6楼2012-11-29 20:55:15
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