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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 反相色谱流动相对出峰的影响
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futurememory

金虫 (小有名气)

[求助] 反相色谱流动相对出峰的影响

实验室HPLC的检测器换了钨灯，想测试是否运行良好，就跑了一个罗丹明B的样品，开始用了乙腈／水（50：50），550nm检测，得到一个很宽很矮的峰（样品浓度没有定量，但溶液肉眼看已经很红了）。后来换用甲醇／水（75：25），就得到很好的峰，强度也很大。又试了甲醇／水（10：90），居然完全没有峰了。样品溶剂和流动相一致。对这个现象很困惑，如果没有出峰，样品是吸附在柱子上吗？希望大家帮忙分析一下，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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努力地生活着
1楼 2013-05-14 05:52:33
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★有帮助 2013-05-18 02:39:33
不出峰可能是条件下没有平衡好或者还没有冲洗出来，还在柱子里
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我为新生
2楼2013-05-14 07:21:08
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★有帮助 2013-05-18 02:39:45
第一在c18下，罗丹明不可能吸附在柱上，洗脱不下来
第二，鉴于甲醇，乙腈，不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题，可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。
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用文字走路，用行动分析
3楼2013-05-14 07:53:41
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futurememory

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-05-14 07:53:41
第一在c18下，罗丹明不可能吸附在柱上，洗脱不下来
第二，鉴于甲醇，乙腈，不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题，可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。

谢谢！实验室的HPLC没有配荧光检测器，用的是PDA检测器，550nm是测的吸收，会受到淬灭的影响吗？
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努力地生活着
4楼2013-05-14 09:00:14
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lzk_1973

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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futurememory: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-05-18 02:40:29
这种情况很正常，在不同流动相条件下，物质的出峰时间和峰不同是完全有可能的。第一个条件出峰宽，峰高自然就很小；第二个条件在相同浓度标准下，分离的好，出峰高，峰宽自然会窄。第三个条件目标物没有被洗脱所以没有峰。这很正常。
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5楼2013-05-14 11:08:13
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Mid.night

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★有帮助 2013-05-18 02:40:41
样品没冲出来，还在柱子里，甲醇比例大点就可以了
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地球很危险，投胎需谨慎……
6楼2013-05-14 11:15:49
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水无痕

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品还在柱子里，如果运行时间加长一些也是可以出峰的只不过物质的保留时间会长很多，色谱峰也会展宽很多。
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7楼2013-05-14 11:39:52
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wanghq121

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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futurememory: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-18 02:40:50
样品在柱子里面，甲醇：水10：90的洗脱能力非常弱，需要很长时间。或者根本洗不下来。
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8楼2013-05-14 15:50:19
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leleyuyu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-18 02:40:59
第三个确实是还在柱子中没有出来~   罗丹明测定的时候有机相比例是要大点的
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9楼2013-05-16 18:37:25
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