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chen1988

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助】反相色谱条件的摸索已有3人参与

一般高效液相反相色谱的色谱条件是怎么摸索的啊？

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1楼 2010-05-04 08:45:29

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hslwsd

木虫 (小有名气)

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★
chen1988(金币+2): 2010-05-04 10:10
xiaodu2007693(金币+1):谢谢指教 2010-05-04 12:40

个人认为：首先，先确定你所分析的成分的极性，选择相应的流动相和合适的柱子（相似相容原理）；其次，确定成分的吸收波长；再次，就是调节流动相的比例和流动相的流速就行了。一般流动相先选择最常用的甲醇、乙腈和水试一下（一般情况下，乙腈对有机物的洗脱能力比甲醇强点），根据出峰时间和峰形对流动相的比例和流速进行调整，必要时进行梯度洗脱。

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2楼2010-05-04 09:21:22

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luomuwuhen

金虫 (著名写手)

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★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流~ 2010-05-04 17:12:18
chen1988(金币+1): 2010-05-05 08:39:57

1.选好柱子，正相or反相
2.调节流动相强度，实现较好分离度
3.反相的话比较麻烦，如果峰形不好需要调节PH或者用缓冲盐替代水相之类。正相要选择好流动相类型。
4.适当的采用梯度洗脱可以节省检测时间和提高检测精度。

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药物合成

3楼2010-05-04 10:52:27

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笑面书生

铁虫 (初入文坛)

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xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流~ 2010-05-04 17:12:05
chen1988(金币+1): 2010-05-05 08:39:53

1、通过紫外扫描确定最大的吸收波长，或者直接用二极管阵列检测器检测，从中找到特定的波长。
2、洗脱从5%的甲醇或者乙腈开始，一直洗到100%的甲醇或者乙腈，用时1~2h。
3、根据上述洗脱情况，进行简化，得到相对适合的洗脱条件。
4、改变洗脱剂的pH值，考察pH值对洗脱效果的影响
5、得到最佳的洗脱条件。

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4楼2010-05-04 17:06:49

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