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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » 【求助】反相色谱条件的摸索
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chen1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】反相色谱条件的摸索 已有3人参与

一般高效液相反相色谱的色谱条件是怎么摸索的啊？
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1楼 2010-05-04 08:45:29
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笑面书生

铁虫 (初入文坛)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流~ 2010-05-04 17:12:05
chen1988(金币+1): 2010-05-05 08:39:53
1、通过紫外扫描确定最大的吸收波长，或者直接用二极管阵列检测器检测，从中找到特定的波长。
2、洗脱从5%的甲醇或者乙腈开始，一直洗到100%的甲醇或者乙腈，用时1~2h。
3、根据上述洗脱情况，进行简化，得到相对适合的洗脱条件。
4、改变洗脱剂的pH值，考察pH值对洗脱效果的影响
5、得到最佳的洗脱条件。
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4楼2010-05-04 17:06:49
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hslwsd

木虫 (小有名气)
★
chen1988(金币+2): 2010-05-04 10:10
xiaodu2007693(金币+1):谢谢指教 2010-05-04 12:40
个人认为：首先，先确定你所分析的成分的极性，选择相应的流动相和合适的柱子（相似相容原理）；其次，确定成分的吸收波长；再次，就是调节流动相的比例和流动相的流速就行了。一般流动相先选择最常用的甲醇、乙腈和水试一下（一般情况下，乙腈对有机物的洗脱能力比甲醇强点），根据出峰时间和峰形对流动相的比例和流速进行调整，必要时进行梯度洗脱。
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2楼2010-05-04 09:21:22
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流~ 2010-05-04 17:12:18
chen1988(金币+1): 2010-05-05 08:39:57
1.选好柱子，正相or反相
2.调节流动相强度，实现较好分离度
3.反相的话比较麻烦，如果峰形不好需要调节PH或者用缓冲盐替代水相之类。正相要选择好流动相类型。
4.适当的采用梯度洗脱可以节省检测时间和提高检测精度。
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药物合成
3楼2010-05-04 10:52:27
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3560280

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
确定好波长后，梯度洗脱呗，最好先用甲醇替代乙腈，因为甲醇会便宜一点，刚开始从5%的甲醇、95%水冲洗，直到最后用纯甲醇洗柱子，每个梯度加20%的甲醇，每个梯度冲洗10min，这只是比较粗的确认条件，等梯度都洗脱好了后可以再根据出峰时间细冲
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你的就是我的，我的还是我的！
6楼2013-11-16 14:18:33
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