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futurememory

金虫 (小有名气)

[求助] 反相色谱流动相对出峰的影响

实验室HPLC的检测器换了钨灯,想测试是否运行良好,就跑了一个罗丹明B的样品,开始用了乙腈/水(50:50),550nm检测,得到一个很宽很矮的峰(样品浓度没有定量,但溶液肉眼看已经很红了)。后来换用甲醇/水(75:25),就得到很好的峰,强度也很大。又试了甲醇/水(10:90),居然完全没有峰了。样品溶剂和流动相一致。对这个现象很困惑,如果没有出峰,样品是吸附在柱子上吗?希望大家帮忙分析一下,谢谢!

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努力地生活着
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futurememory

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-05-14 07:53:41
第一在c18下,罗丹明不可能吸附在柱上,洗脱不下来
第二,鉴于甲醇,乙腈,不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题,可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。

谢谢!实验室的HPLC没有配荧光检测器,用的是PDA检测器,550nm是测的吸收,会受到淬灭的影响吗?
努力地生活着
4楼2013-05-14 09:00:14
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
futurememory: 金币+1, 有帮助 2013-05-18 02:39:33
不出峰可能是条件下没有平衡好或者还没有冲洗出来,还在柱子里
我为新生
2楼2013-05-14 07:21:08
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
futurememory: 金币+1, 有帮助 2013-05-18 02:39:45
第一在c18下,罗丹明不可能吸附在柱上,洗脱不下来
第二,鉴于甲醇,乙腈,不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题,可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。
用文字走路,用行动分析
3楼2013-05-14 07:53:41
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lzk_1973

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
futurememory: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-05-18 02:40:29
这种情况很正常,在不同流动相条件下,物质的出峰时间和峰不同是完全有可能的。第一个条件出峰宽,峰高自然就很小;第二个条件在相同浓度标准下,分离的好,出峰高,峰宽自然会窄。第三个条件目标物没有被洗脱所以没有峰。这很正常。
5楼2013-05-14 11:08:13
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