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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 反相色谱流动相对出峰的影响
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futurememory

金虫 (小有名气)

[求助] 反相色谱流动相对出峰的影响

实验室HPLC的检测器换了钨灯，想测试是否运行良好，就跑了一个罗丹明B的样品，开始用了乙腈／水（50：50），550nm检测，得到一个很宽很矮的峰（样品浓度没有定量，但溶液肉眼看已经很红了）。后来换用甲醇／水（75：25），就得到很好的峰，强度也很大。又试了甲醇／水（10：90），居然完全没有峰了。样品溶剂和流动相一致。对这个现象很困惑，如果没有出峰，样品是吸附在柱子上吗？希望大家帮忙分析一下，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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努力地生活着
1楼 2013-05-14 05:52:33
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★有帮助 2013-05-18 02:39:45
第一在c18下，罗丹明不可能吸附在柱上，洗脱不下来
第二，鉴于甲醇，乙腈，不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题，可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。
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用文字走路，用行动分析
3楼2013-05-14 07:53:41
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+1, ★有帮助 2013-05-18 02:39:33
不出峰可能是条件下没有平衡好或者还没有冲洗出来，还在柱子里
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我为新生
2楼2013-05-14 07:21:08
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futurememory

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-05-14 07:53:41
第一在c18下，罗丹明不可能吸附在柱上，洗脱不下来
第二，鉴于甲醇，乙腈，不同试剂和比例下罗丹明出峰不同的问题，可以考虑是不是不同的试剂对罗丹明发光有猝灭作用。

谢谢！实验室的HPLC没有配荧光检测器，用的是PDA检测器，550nm是测的吸收，会受到淬灭的影响吗？
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努力地生活着
4楼2013-05-14 09:00:14
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lzk_1973

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
futurememory: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-05-18 02:40:29
这种情况很正常，在不同流动相条件下，物质的出峰时间和峰不同是完全有可能的。第一个条件出峰宽，峰高自然就很小；第二个条件在相同浓度标准下，分离的好，出峰高，峰宽自然会窄。第三个条件目标物没有被洗脱所以没有峰。这很正常。
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5楼2013-05-14 11:08:13
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