| 查看: 4172 | 回复: 10 | |||
speculiar银虫 (小有名气)
|
[交流]
请问谁用过GE的预装柱（镍柱） 已有3人参与
|
||
|
GE赠送的1ml用于纯化组氨酸融合蛋白的预装柱。 我用着感觉很不好，不知版内有哪位用过，是否好用，有啥经验可以传授的？ 万分感谢，急于毕业，停滞在纯化这一步很久了。万分感谢~~~泪奔~~~~~~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
0854总分272
已经有4人回复
-
材料工程274求调剂
已经有5人回复
-
272求调剂
已经有8人回复
-
课题组接收材料类调剂研究生
已经有5人回复
-
261求调剂
已经有3人回复
-
化工270求调剂
已经有9人回复
-
考研复试调剂，过国家线的同学都可报名
已经有6人回复
-
0805总分292，求调剂
已经有9人回复
-
0856调剂
已经有8人回复
-
275求调剂
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问 有没有人装过GE的凝胶过滤色谱柱（sephadex-G10）
已经有27人回复
- 请问有哪位朋友用过大连中汇达公司的PEG-20M 的毛细管柱
已经有3人回复
- 有谁可以教我过柱子？
已经有10人回复
- 出售伯乐的阴离子交换层析预装柱和GST标签纯化预装柱！
已经有26人回复
- 过柱子和重结晶，谁损失的样品多～～
已经有21人回复
- 请问谁知道HLB固相萃取小柱多少钱一个？多少个一批卖？谁知道告诉告诉我吧。。。
已经有17人回复
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
采用Ni柱对组氨酸标记蛋白质进行分离纯化的过程通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。 平衡：用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。实际操作中，一般选用中性/弱碱性（pH 7~8）的高盐（0.15~1.0 M NaCl或其它中性盐）缓冲液。其中常用磷酸盐缓冲体系，如20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4。对于结合力较强的带组氨酸标记的蛋白质，平衡缓冲液中可加入低浓度（20~40 mM）的咪唑。 进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。 为了减少杂蛋白在层析柱上的吸附，可在确保目标蛋白吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋白，相应地可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加入8M Urea或6M Gua-HCl。 淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。 洗脱：洗脱一般有两种方式，一是采用竞争试剂，如咪唑（0~0.5M）、组氨酸（0~0.05M）、氯化铵（0~2M）等将蛋白质从柱子上置换下来；二是减小pH值，洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在pH 4~6的范围内可被洗下来。用竞争试剂咪唑或减小pH值的方法洗脱蛋白质，金属离子仍结合在柱子上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来。 洗脱缓冲液中必须加入0.15~1.0 M NaCl以消除离子交换作用。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进行，可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。 |
4楼2009-10-28 10:00:40
2楼2009-10-27 22:39:43
muchong5577
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 929.2
- 散金: 67
- 红花: 3
- 帖子: 675
- 在线: 136.6小时
- 虫号: 703384
- 注册: 2009-02-18
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2009-10-28 01:35:28
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 13652.1
- 散金: 977
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 2130
- 在线: 344.5小时
- 虫号: 275024
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 抗体工程学
5楼2009-10-28 11:14:32
wjswj
木虫 (正式写手)
小木虫领金币专业户
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2591.2
- 散金: 12
- 红花: 2
- 帖子: 692
- 在线: 45.3小时
- 虫号: 493165
- 注册: 2008-01-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2009-10-28 11:51:31
7楼2009-10-29 16:16:12
jlc0225
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 18984.5
- 红花: 2
- 帖子: 1681
- 在线: 146.6小时
- 虫号: 590390
- 注册: 2008-08-31
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2009-10-29 16:23:57
9楼2010-07-21 10:15:02
10楼2010-07-21 11:09:48
