| 查看: 7386 | 回复: 8 | |||
[求助]
请问qRT-PCR的标准曲线中扩增效率过高是怎么回事 已有3人参与
|
|
我在做4个目的基因和一个内参基因qRT-PCR的标准曲线时，扩增效率全部都超过了120%，最高的甚至达到190%。我现在唯一能确定的就是在加样的过程中不同稀释梯度（10倍的梯度）的模板cDNA在加样过程中有相互污染，所以Ct值也不成线性的变化。我现在就是再重新做并严格避免污染，但是除了我确定的这个原因，还有其他的一些什么原因可能导致了扩增效率过高呢？ 请有经验的高手指教，非常谢谢！ 还有一个问题，就是我的内参基因本身的丰度比其他4个目的基因的高很多，因为即使模板稀释了10^5倍了，但Ct值也没有超过20，而其他的目的基因的Ct值都在24到31之间，这种内参基因和目的基因本身的丰度悬殊这么大，这样的内参可以用来作为内参吗？是不是找一个与目的基因相当的才行呢？感谢解惑！ |
回复此楼» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有232人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- QPCR扩增曲线异常
已经有12人回复
- 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么?
已经有15人回复
- RT-PCR扩增效率
已经有7人回复
- Real-time PCR溶解曲线Tm值，是不是在不同的仪器上做出来的不一样？
已经有5人回复
- 荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
已经有4人回复
- 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
已经有27人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- QPCR扩增效率太低
已经有20人回复
- rt-qpcr标准曲线问题
已经有10人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- 荧光定量PCR扩增效率低
已经有16人回复
- qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因
已经有6人回复
- 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
已经有14人回复
- real-time PCR相对定量2 -△△CT法中用来判断扩增效率的标准曲线怎么制作？
已经有8人回复
- 着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点
已经有12人回复
- 荧光定量PCR扩增曲线的分析
已经有7人回复
- 定量PCR扩增效率过高(SYBR)
已经有3人回复
- 一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！
已经有12人回复
- 荧光pcr标准曲线问题
已经有21人回复
- RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR
已经有16人回复
- 【求助/交流】rt-PCR作出的扩增曲线刚开始为什么会有一条基线？
已经有5人回复
- 【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进？
已经有5人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-01 15:23:56
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-26 08:20:53
wybiology: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-03-01 15:23:56
|
... 1. 引物不合适，不仅仅有扩增效率不够100%的情况出现，同样也有扩增效率超过100%的情况，普通认为90~110%的扩增效率比较合适。你的扩增效率过高，你需要在引物上下下工夫。 2. 这样的内参肯定不合适，内参有很多，建议第一次做的时候，多上几个内参（3个左右）一起看看比较合适。 祝实验顺利，说的不周之处希望高手指点  |
2楼2014-02-25 20:22:54
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
3楼2014-02-25 20:25:58
4楼2014-02-25 22:33:54
5楼2014-02-26 15:28:00
jiaolong11a
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 487.3
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 227
- 在线: 29.5小时
- 虫号: 1244690
- 注册: 2011-03-25
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
6楼2014-02-26 16:06:58
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2014-02-26 21:35:00
by小宁
木虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1613.7
- 帖子: 43
- 在线: 19.9小时
- 虫号: 3020213
- 注册: 2014-03-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2015-07-08 14:41:20
9楼2015-09-04 13:00:31
