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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切问题~
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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 双酶切问题~ 已有5人参与

双酶切进行转化后，铺板，为什么长满了整个板，都是菌，而且菌落之间模糊不清，不是稀落的像星星一样的，求解释
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1楼 2014-02-17 21:40:00
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)
污染了。。。。。
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2楼2014-02-17 21:59:39
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永远一片天

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huangrui1988 at 2014-02-17 21:59:39
污染了。。。。。

可是，为什么会污染呢，大概是哪一步呢
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3楼2014-02-18 08:51:13
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-02-18 08:51:13
可是，为什么会污染呢，大概是哪一步呢...

感受态或者是涂布的时候加的抗生素不够多。
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4楼2014-02-18 10:31:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化时做对照了吗？
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5楼2014-02-18 10:56:03
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 11:45:45
这个感觉像是宿主细胞都长出来了，用宿主细胞在抗性平板上检查一下，是否抗生素失效或者宿主细胞有问题。
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6楼2014-02-18 11:21:44
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
严重怀疑酶切反应时间不够长，存在没有被酶切到的完整质粒。
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7楼2014-02-18 14:08:29
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感受态的问题，不是其他的问题！
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8楼2014-02-18 14:14:43
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的质粒没有切开，导致转化的不是重组质粒而是载体的那个质粒。这种可能性最大。
污染的话，那就是板上有至少2种形态的菌才对。
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9楼2014-02-18 17:01:37
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